冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定论文.docVIP

　　冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定论文 【摘要】 ［目的］从冬虫夏草菌丝体发酵液中提取，分离虫草多糖，并建立样品中多糖的含量测定方法。［方法］采用D101大孔树脂分离冬虫夏草菌丝体发酵液中的多糖；采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量。［结果］虫草多糖的得率为142g/L ；样品中虫草多糖的含量为706%。 ［结论］方法简便，准确，重现性好，可用于冬虫夏草菌丝体发酵液中虫草多糖的提取纯化和含量测定。 【关键词】 冬虫夏草菌丝体发酵液 多糖 大孔树脂 分离纯化 含量测定 Separation, Purification and Content Test of Polysaccharide in Zymotic Fluid of Cordycepts Mycelium Abstract：［Objective］ To extract and separate polysaccharide from Cordyceps mycelium, and establish content test method of polysaccharide in sample. ［Method］ Take foramen magnum resin D101 to separate polysaccharide from the zymotic fluid of Cordyceps mycelium, the phenol-SO2 method to measure polysaccharide in sample. ［Result］ The receiving rate of polysaccharide sample. ［Conclusion］ The said method is simple, convenient, correct, can be used for separation, purification and content measurement of polysaccharide from the zymotic fluid of Cordyceps mycelium. Key otic fluid of Cordyceps mycelium; polysaccharide; foramen magnum resin; separation and purification; content measurement 冬虫夏草(Cordyceps)为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是高级滋补药品和名贵中药材。随着它的药用价值不断增大和药用范围的不断扩大，对虫草的需求量也在不断的增加。但是.freelL，用80%乙醇沉淀3次，室温下放置24h，离心15min（3000r/min），弃去上清液，取沉淀物，减压干燥，得粗多糖219g。 22 虫草粗多糖纯化 取上述粗多糖219g，加水66mL溶解，取水溶液，采用sevag法［4］（1/5体积的氯仿，及1/5体积的正丁醇，剧烈震荡，静置分层后，过滤，取水层）去除蛋白质，操作3次后，将水层减压蒸干，用95%乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤粗多糖，减压干燥，得纯化粗多糖184g。 23 虫草多糖精制 231 树脂预处理［5］ 取市售D101大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗涤，至洗脱液蒸干后无残留物，反复洗脱保存备用。 232 装柱 以乙醇湿法装柱，用纯乙醇反复洗脱，至洗脱液与水混合不呈白色混浊为止（取1mL乙醇液加5mL水），再以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味，备用。 233 精制 将纯化的粗多糖溶解(上样量∶树脂量=1∶8~10)加到已处理好的D101大孔吸附树脂柱上，先用水洗脱至洗脱液无色，流速约为1mL/min，再用5倍量柱体积的30%乙醇、5倍量柱体积的50%乙醇洗脱，流速约为1mL/min，分别收集洗脱液。最后用95%乙醇洗脱至树脂无色，备用。斐林反应［6］表明：多糖主要集中在水洗脱部位，浓缩水洗脱液后得到精制多糖104g，得率为142g/L。 24 样品中虫草多糖的含量测定 241 对照品溶液的制备 取于105℃干燥至恒重的葡糖糖对照品2500mg，精密称定，置500mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得05mg/mL的葡萄糖对照品溶液。 242 标准曲线的制备 精密量取对照溶液20ml、40ml、60ml、80ml、100ml于50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。分别精密吸取以上对照品溶液10ml于10ml试管中，加5%苯酚［7］试液10ml，摇匀，迅速加浓硫酸50ml，振摇2min，置沸