动力性肺动脉高压犬肺动脉PCNA及α┐平滑肌肌动蛋白的表达论文.docVIP

　　动力性肺动脉高压犬肺动脉PCNA及α┐平滑肌肌动蛋白的表达论文 .freelonary;diseasemodels，animal;hemodynamics;proliferatingcellnuclearantigen;actins Abstract:AIMToexploretheactionofpulmonaryarterysmoothmusclecellproliferationinformationofdynamicpul-monaryhypertension.METHODSUsingthepulmonaryhy-pertension（PH）modelofshuntfromdescendingaorta-to-leftloonaryartery，thesampleofthelungtissueinshuntdogsinationofPAandα-actinmunohis-tochemistrymethodusingPCANandα-actinantibodies.Theslicesofpulmonarytissueicroscope，andthedataagepatternanalysor.ThepositivecellsofPAandα-actinonaryarteryonaryarterymilderthanthatinleftpulmonary，andcontrolgrouponaryarteriesorethanthatofrightlungandupperleftlobe.Theindexofcellproliferationa，11%inmediaand7%inad-ventitiaofleftloonaryarteriesrespectively，andon-lyafeoothmusclecellproliferationmightplayapartintheformationofdynamicpulmonaryhy-pertensioninexperimentaldogs，andmaybeidenticalonarypressureandremodelofpul-monarybloodvessel. 0引言 肺动脉高压往往伴随肺动脉结构改变，而肺动脉的病理改变又是肺动脉压力持续上升的形态学基础，其最基本的病理改变既是平滑肌细胞的增殖肥大.增殖细胞核抗原（PA），平滑肌肌动蛋白（α-actin）是反映细胞增殖状态的重要生物学指标.我们利用免疫组化技术观察平滑肌细胞增殖在肺动脉高压发病过程中的作用. 1材料和方法 1.1材料 杂种幼犬，年龄2～3mo，体质量3.5～4.5kg，雌雄不拘，分两组:组1为分流组（n=12），全部行左侧开胸，降主动脉向左下肺动脉分流术，术后90d放血处死，取肺组织行病理学检测.鼠抗人PA（1∶100）抗体，鼠抗人α-actin（1∶100）抗体和生物素化羊抗鼠（1∶200）抗体，均为博士德公司产品，微波修复液DAB显色液，0.01mmol L-1PBS液为本院病理科配制.图像分析仪（LeicaQ570c）为德国产品. 1.2方法 利用降主动脉―左下肺动脉分流建立的幼犬动力性肺动脉高压模型［1］，取90d肺组织病理切片，用免疫S-P两步法进行.石蜡切片脱蜡至水后0.01molL-1pH7.4PBS液洗涤5min×3次（下同），30mL L-1H2O2封闭30min，置于微波处理液中微波处理10min，冷却，洗涤，加一抗4℃过夜，37℃水箱温浴60min，生物素化二抗（羊抗鼠）37℃，30min，DAB5mg+H2O25mL显色5～10min后水洗，苏木素衬染30s，盐酸酒精分化，氨水返蓝，水洗，脱水、透明、常规封片镜检.每张切片随机选取5个不同部位，计数每个高倍镜下平滑肌细胞总数及PA细胞阳性数计算细胞增殖指数.空白对照实验:PBS替代第一抗体，替代对照实验:小牛血清替代第一抗体.统计学处理:数据以百分数（%）表示，统计学处理用方差分析（χ2）处理. 2结果 2.1PA免疫组化结果 手术后90d可见分流犬左下肺动脉内膜细胞核内出现较多棕黄色染色，中膜较少，右肺动脉及左上肺动脉仅有少量表达，空白对照组和替代对照组呈阴性表达（P 0.01，Tab1）.表1分流犬不同部位肺动脉细胞增殖指数（略） 2.2α-actin免疫组化结果 α-actin免疫组化染色显示分流犬左下肺动脉中膜α-actin呈阳性表达，对照组阴性表达.手术后90d可见分流犬左下肺动脉平滑肌细胞胞质内出现较多棕黄色染色（P 0.01），右肺动脉及左上肺动脉仅有少量，空白对照组替代对照组呈阴性表达. 2.3Ⅰ，Ⅲ型胶原纤维免疫组化