吡格列酮对糖尿病大鼠肺组织TNFα和NFκB的影响论文.docVIP

　　吡格列酮对糖尿病大鼠肺组织TNFα和NFκB的影响论文 【摘要】 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ激动剂吡格列酮对糖尿病大鼠肺部损害的保护作用及其机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素(55 mg/kg)制成糖尿病动物模型。48只健康SD雄性大鼠随机分为4组：对照组、糖尿病组、高、低剂量吡格列酮治疗组。8 atic glycation，NEG)和氧化应激可产生大量诸如肿瘤坏死因子（TNF）α、白介素（IL）6、IL12等促炎细胞因子和促炎症介质.freelg/kg体重的链脲佐菌素(STZ，溶解于0.1 mol/L pH4.2柠檬酸缓冲液)腹腔注射。以随机血糖＞16.7 mmol/L，尿糖强阳性作为DM动物模型建立标准，未达到标准者均淘汰。 1.2.2 对照组处理 对照组仅注射相同体积的柠檬酸缓冲液。 1.2.3 吡格列酮治疗组 模型成功后，吡格列酮治疗组分别予10、50 mg/kg吡格列酮经食道灌胃注入。 1.3 检测指标 1.3.1 肺组织TNFα检测 将存活的4组动物于第8周以1%戊巴比妥钠(30 mg/kg体重)腹腔注射麻醉；将大鼠固定于手术台上，打开胸腔，取出一小块右侧肺组织剪成小块；滤纸吸干残血后，迅速称取400 mg，加入1 ml生理盐水；于冰浴中用超声波匀浆机匀浆，每次匀浆15 s后，间歇20 s待标本降温后再匀浆，反复以上操作3次；将制成的匀浆液用低温离心机在4℃，以3 000 r/min的速度离心15 min；取上清液用ELISA方法测定TNFα水平。 1.3.2 肺组织学检查 取右肺组织常规作石蜡包埋切片，行HE染色，光镜观察。 1.3.3 肺组织NFκB活性表达检测 兔抗鼠NFκB p65抗体∶蒸馏水按1∶50稀释，常规行免疫组化染色检测肺组织NFκB表达。阳性评分标准：镜下观察5个高倍镜视野染色结果，细胞核或(和)细胞浆含棕黄色颗粒为阳性；根据免疫组化着色强度评分(0分，无；1分，弱；2分，中；3分，强)和阳性细胞率评分(0分，＜5%；1分，5%～10%；2分，10%～20%；3分，20%～50%；4分，＞50%)之和为该病例评分值。以试剂盒内的阳性切片作为阳性对照，以PBS液分别替代一抗、二抗及SA/HRP作为每次染色阴性对照。 1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件，数据资料均以x±s表示，各组间比较采用单因素方差分析。 2 结果 2.1 肺组织TNFα检测结果 DM组大鼠肺组织TNFα水平〔（4.64±0.35）ng/ml〕明显高于对照组〔（2.01±0.22）ng/ml〕(P＜0.05)，高、低剂量吡格列酮治疗组肺组织TNFα水平〔（2.70±0.42）,（2.85±0.31）ng/ml〕均较DM组显著下降(P＜0.05)，但高、低剂量吡格列酮治疗组间TNFα水平差异无显著性(P＞0.05)。 2.2 病理组织学改变 DM大鼠肺组织与正常大鼠比较，其肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞基底膜明显增厚，肺泡间隔增宽，间质中胶原和弹性蛋白含量增多，部分肺泡腔萎缩甚至塌陷，部分肺泡腔内有多量炎性细胞浸润。吡格列酮治疗组病变程度减轻，见图1。 2.3 各组免疫组织化学检测结果 对照组大鼠气道上皮、肺泡上皮、肺泡巨噬细胞可见NFκB弱表达（0.5±0.2），DM组大鼠在肺组织上述部位NFκB表达明显增高（5.9±1.3）(P＜0.05)。高、低剂量吡格列酮治疗组NFκB表达（4.5±0.9,4.3±1.1）均明显减少(P＜0.05)，但治疗组间比较无显著性差异(P＞0.05)。见图2、图3。 图1 各组肺组织病理组织学改变(HE，×100)（略） 图2 DM组大鼠NFκB表达(DAB，×100)（略） 图3 吡格列酮治疗组NFκB表达(DAB，×100)（略） 3 讨论 DM患者感染率高达36.8%，并且仍有上升趋势，且以肺部感染最为常见。长期的高糖刺激可激活单核及肺泡巨噬细胞等释放大量的TNFα、IL12、IL6、IL8等促炎细胞因子、炎症介质，最终导致患者发生全身多器官功能损害〔3〕。 TNFα主要由单核及巨噬细胞分泌，可以激活炎症细胞，促使白细胞趋化、黏附，诱导其脱颗粒、释放溶酶体，刺激一氧化氮和氧自由基的生成。同时，TNFα通过诱导IL1等细胞因子生成，引发肺部肥大细胞与血液嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放组织胺及白三烯等炎症介质，使肺毛细血管通透性增加，形成肺间质水肿，导致肺损伤〔4〕。研究发现，TNFα、IL12、IL6等多种炎症介质的基因调控区均具有NFκB的结合位点，TNFα的表达在基因水平上受到NFκB的调控。NFκB的适度活化对于机体抵御病原微生物的危害具有重要意