02第二节 仪器鉴别法2.pptVIP

 有机药物分子中含有共轭结构，生、助色基团而显示特征吸收光谱，可作为鉴别的依据。 光谱简单，专属性差。 紫外-可见光区的波长范围 紫外光谱的特征 常用的方法有： ★ 对比法：测定供试品的吸收光谱或规定的信息参数对比；或与对照光谱及特征参数对比；  ★ 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长； ★ 规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度； ★ 规定吸收波长的吸收系数法； ★ 规定吸收波长的吸收度比值法； ★ 经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。 以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。 紫外-可见分光光度计的主要部件  专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。 主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。 （1）试样制备方法 2）采用压片法时，若样品（包括盐酸盐）与溴化钾之间不发生离子交换反应，则采用溴化钾作为制片基质。否则，盐酸盐样品制片时必须使用氯化钾基质。 3）测定时应注意二氧化碳和水汽（3440cm-1及1630cm-1）等的大气干扰，必要时，应采取适当措施（如采用干燥氮气吹扫，真空）加以改善。 4）仪器间分辨率的差异及不同的操作条件（如狭缝程序，扫描速度等）可能影响药品光谱图的判断。 需用在比较样品的光谱图前，首先比较聚苯乙烯薄膜的光谱图。 5）本法对于多组分药物或存在多晶现象而又无可重复转晶方法的药物不适用。 液相色谱仪 HPLC流程及主要部件 2.主要部件 (2)梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 b.荧光检测器 流动相类别 流动相选择 选择流动相时应注意的几个问题 气相色谱法 气相色谱法是采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 工作流程示图 1.仪器分析应用数量增加，尤其是红外光谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。 2.制剂广泛采用IR法鉴别。与原料药相比，制剂需先分离再压片绘制图谱。 鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响鉴别反应的主要因素有被测物浓度，试剂的用量，溶液的温度、 pH ，反应时间和干扰物质的存在等。 （一）反应灵敏度和空白试验 在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量来表示： 最低检出量（又称检出限量） （以m表示），就是应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出试验结果的供试品的最小量，其单位通常用微克（μg）表示。 最低检出浓度（又称界限浓度），是应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，通常以1: V(或1:G）表示，其中V(或G)表示含有1g重某供试品的溶液的毫升（或克）数。 影响条件： 1.在选用灵敏度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂，非常洁净的器皿，才能保证鉴别试验结果的可靠性。 2.为了消除试剂和器皿可能带来的影响，应同时进行空白试验（blank test)以供对照。 空白试验，是在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。 3.与分析方法、观察方式、反应条件、人的观察能力等因素有关。 （二）提高反应灵敏度的方法 a.紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。 色谱法 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； 色谱法 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 色谱法 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 色谱法 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇