广藿香愈伤组织诱导和分化再生植株的研究论文.docVIP

　　广藿香愈伤组织诱导和分化再生植株的研究论文 林小桦，贺红，吴立蓉，张燕玲，刘星 【摘要】 【目的】开展广藿香愈伤组织的诱导及分化再生植株的研究，建立高效的组织培养再生系统。【方法】以广藿香叶片、带节茎、不带节茎及根尖为材料进行离体培养，筛选影响愈伤组织诱导、增殖及分化的因素。【结果】6苄氨基嘌呤(BA)或N苯基N123噻二唑5脲(TDZ)与α萘乙酸(NAA)配合有利于愈伤组织的诱导，BA的适宜浓度为02～05mg/L；4种外植体中.freelon cablin(Blanco)Benth. are studied to establish a highefficiency regeneration system for tissue culture.MethodsThe leaf segments, nodular stem segments, stem segments and root tips from Pogostemon cablin(Blanco)Benth. ultiplication and differentiation of callus inopurine (BA) or thidiazuron (TDZ) bined al concentrations of BA g/L. Nodular stem segments and stem segments ost suitable explants for callus induction. The medium containing BA and NAA promoted the multiplication of callus. The multiplication rate and differentiation rate of 30day callus uch higher than those of 60day callus. BA leaf segments exerted a higher differentiation rate. ConclusionA highefficiency regeneration system of callus induction and plant regeneration from Pogostemon cablin(Blanco)Benth.has been established. Key ent;INVITRO CULTURE;CALLUS 广藿香［Pogostemon cablin (Blanco) Benth.］为唇形科刺蕊草属植物，以干燥地上部分入药，其性辛、微温。具有芳香化湿，开胃止呕，发表解暑的功效［1］。广藿香为广东道地药材，“十大广药”之一，是多种著名中成药“藿香正气丸”、“藿胆丸”等以及现代中药制剂“抗病毒口服液”的主要原料。广藿香原产于菲律宾、马来西亚等国，最早自宋代引入我国，栽培历史悠久。广藿香生产中面临青枯病的危害，该病由青枯菌（Ralstonia Solanacearum）侵染所致，为典型的维管束病害［2~3］。在我国产区栽培的广藿香，罕见开花结实［4］，长期以来，生产上采用扦插繁殖，病原体通过无性繁殖传递，且逐代积累，危害越来越严重，迫切需要进行抗病品种的选育。近年来，基因转移及人工诱变等改良药用植物农艺性状的技术，为广藿香抗病育种提供了可能，而要开展相关的研究，首先要建立高效的组织培养再生系统。本文以广藿香多种外植体为材料，筛选影响广藿香愈伤组织诱导、增殖及分化的多种因素，以期建立高效的愈伤组织诱导及分化再生植株的离体再生系统，为遗传转化及人工诱变育种奠定基础，现报道如下。 1材料和方法 11材料试验 材料采自广州中医药大学药圃，选择生长健壮、无病虫害的广藿香单株，取其顶芽、带节茎及叶片；经蒸馏水冲洗干净后，用体积分数为70%乙醇浸泡30s，转入1g/L的HgCl2溶液浸泡消毒10min，再用无菌水漂洗5～8次，把残留HgCl2漂洗干净，接种于 Murashge and Tucker（MT）+02mg/L 6苄氨基嘌呤(BA)培养基上，诱导丛芽的生成，待丛芽长出后将其移至MT培养基中培养，试管苗长至5～7cm时即可作材料使用。 12方法 121外植体培养 取广藿香试管苗的叶片、带节茎、不带节茎及根尖为外植体进行培养。外植体在培养基中的放置方式为：叶片及根尖平放，带节茎及不带节茎为形态学下端下插。每种处理接种外植体数为30块左右，设置3次重复。 122愈伤组织的诱导 增殖以广藿香叶片及带节茎等诱导愈伤组织，选取未分化出芽的愈伤组织接种至增殖培养基中。每种处理一般接种30块愈伤组织，设置3次重复。诱