异甘草素对Hela细胞氧化还原状态的影响论文.docVIP

　　异甘草素对Hela细胞氧化还原状态的影响论文 陈朋，张娟，王振华，郑秋生 【摘要】 目的探讨异甘草素体外抗氧化作用及其对Hela细胞氧化还原状态的影响，考察异甘草素抑制宫颈癌Hela细胞增殖与活性氧的关系。方法采用化学方法测定异甘草素对羟自由基，DPPH，超氧阴离子清除率和抑制脂质过氧化的抑制率，考察其抗氧化效果;SRB法测定细胞活力.freelg/L抗氧化，高于7.5 mg/L浓度促氧化的变化。结论异甘草素浓度依赖性地抑制宫颈癌Hela细胞的增殖;异甘草素低浓度时清除细胞内活性氧，高浓度时促进自由基的生成，促进Hela细胞凋亡。 【关键词】 异甘草素;体外抗氧化;自由基;活性氧 Abstract：ObjectiveTo investigate the influence of isoliquiritigenin(ISL) on the oxidative -reductive state in Hela cells and to study the relationship betethod ine the effect of ISL on the scavenging rate of hydroxyl radical, DPPH, superoxide anion and on the inhibition rate of lipid peroxidation. The intracellular ROS levels easured ercial test kits.ResultsISL had strong antioxidant activities in vitro and inhibited the proliferation of Hela cells in a concentration-dependent manner. SF(苯甲基磺酰氯,北京拜尔迪生物公司) ;超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、过氧化氢酶(CAT)测试盒、均为南京建成生物工程研究所产品;1，1-二苯基-2-苦肼基自由基(Sigma公司);Tris(北京拜尔迪生物公司);2-硫代巴比妥酸(上海科丰化学试剂有限公司);焦性没食子酸(天津市富宇精细化工有限公司);邻二氮菲(天津市天新精细化工开发中心);菲咯嗪(合肥博美生物科技有限责任公司);亚油酸(Sigma公司);硫氰酸铵(天津科盟化工工贸有限公司);其余试剂均为分析纯。宫颈癌Hela细胞，新疆特种植物药资源教育部重点实验室。 1.2 仪器多功能酶标仪(Thermo 3001 VARIOSKAN FLASH);AR-2140型万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司制造);CO2培养箱(Forma 3110，USA); TGL20M台式高速冷冻离心机(湖南凯达科学仪器有限公司);蔡司荧光倒置显微镜。 2 方法 2.1 ISL体外抗氧化方法 2.1.1 对羟自由基的清除作用 6Fenton反应测定羟自由基清除率。空白组：20 μl 7.5 mmol/L邻二氮菲溶液，40 μl 0.15 mol/L的PBS (pH=7.4)，100 μl蒸馏水，20 μl 7.5 mmol/L的硫酸亚铁，20 μl 的1%的H2O2充分混匀。37 ℃水浴中60 min，在536 nm处，测定吸光度为A1;空白对照组：以20 μl 蒸馏水代替H2O2重复上述操作，测定吸光度为A2;样品组：以100 μl 的样品溶液(终浓度为6.25，12.5，25，50，100 mg/L)代替100 μl 蒸馏水重复空白组操作，测定吸光度为A3;样品对照组：40 μl 0.15 mol/L的PBS中加100 μl 的样品， 60 μl 的蒸馏水，测定吸光度为A4;空白参比组：40 μl 0.15 mol/L的PBS加入160 μl 的蒸馏水，测定吸光度为A5，平行测定3 次。清除率(%)=(A3-A4-A1+A5)/(A2- A1)×100% 2.1.2 对DPPH的清除作用7100 μl 0.06 mmol/L的DPPH乙醇溶液中加入100 μl样品溶液(终浓度为6.25,12.5,25,50,.freelg/L)，分别计算清除率。清除率(%)=A0-(A1-A2)/A0×100%式中：A0为DPPH溶液100 μl +无水乙醇100 μl 的吸光度;A1为DPPH溶液100 μl +样品溶液100 μl 的吸光度;A2为样品溶液100 μl +无水乙醇100 μl 的吸光度。 2.1.3 对超氧阴离子的清除作用 8取浓度为0.05 mol/L的Tris-HCl(pH=8.2)缓冲液100 μl，25 ℃预热20 min，加入50 μl样品溶液(终浓度为6.25, 12.5, 25, 50, 100