氨基酸代谢MetabolismofAminoAcids汇编.ppt

第 二 节 重组DNA技术 一、相关概念 DNA克隆 工具酶 目的基因 基因载体 二、基本原理及操作步骤 （二）工具酶 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶Ⅰ 逆转录酶 T4 DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶 （三）目的基因 能自主复制； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。 三、重组技术与医学的关系 8. 在已知DNA序列情况下,获取目的DNA最方便的方法是 A 人工化学合成 B 基因组文库法 C cDNA文库法 D PCR法 E 从染色体DNA直接提取 9. 基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是 A DNA聚合酶 B RNA聚合酶 C DNA连接酶 D RNA连接酶 E 限制性核酸内切酶 10. 表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是 A E.coli 表达体系 B 原核表达体系 C 酵母表达体系 D 昆虫表达体系 E 哺乳类细胞表达体系 11. The nucleotide number which restriction enzyme recognize in DNA nucleotide sequence is A 4, 5 or 6 B 5, 6 or 7 C 6, 7 or 8 D 4, 6 or 8 E 4 - 8 12. The technique used in identification of DNA is A northern blotting B southern blotting C Western blotting D affinity chromatography E ion exchange chromatography 13. The way of gene recombination doesn’t include A transformation B transduction C transposition D change-over转换 E integration 14. The abbreviation of polymerase chain reaction is A PRC B PER C PDR D BCR E PCR 15. 对于重组体的筛选,属于非直接选择法的是 A 免疫化学法 B 原位杂交法 C southern 印迹 D 补救标志筛选 E 酶联免疫筛选 16. 基因工程中,目的基因地来源有 A 化学合成 B PCR合成 C cDNA文库 D 基因组文库 E 组织细胞中染色体DNA直接提取 17. 质粒DNA等作为基因工程载体必须具备的条件是 A 能独立自主复制 B 易转化 C 易筛选(质粒DNA含有抗药性基因等) D 具有合适的限制性核酸内切酶酶切位点 E 易提取获得 18. 将表达载体导入真核细胞的转染方法有 A 磷酸钙转染 B DEAE葡萄糖介导转染 C 电穿孔 D 脂质体转染 E 显微注射 19. gene cloning also be called A DNA recombination B RNA recombination C DNA cloning D RNA cloning E protein replication 20. The enzyme tools commonly used in gene cloning technique are A restriction enzyme B DNA polymerase I C DNA ligase D reverse transcriptase E terminal transferase 左下角处有超级链接到配伍末端 recombinant screening amp or tet etc + plasmid extraction digist with restriction enzeme 1 2 1 2 marker - + 1 2 marker - + target gene amplification α 互补的检测 重组DNA技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组DNA cDNA 人工合成 PCR产物 限制酶消化 开环载体DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，转染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 菌落原位杂交 表达体系的建立