草地贪夜蛾细胞系IPLB—Sf-9酵母双杂交cDNA文库的构建.pdfVIP

环境 昆虫 学 报 Mr，f ron nf lD脚 D ，March2009，31(1)：41—45 ISSN1674_0858 doi：l0．3969／j．issn．1674—0858．2009．01．006 草地贪夜蛾细胞系 IPLB—Sf_9酵母双 杂交 cDNA文库的构建 王春苗，钟雪萍，刘攀峰，黎路林 (华中师范大学生命科学学院，遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室，武汉 430079) 摘要：草地贪夜蛾 如P把rⅡ向 如是危害玉米、高粱等农作物的重要害虫。草地贪夜蛾卵巢细胞系 IPLB—sf_9 (s )广泛应用于病毒学研究和真核生物基因表达。本研究从 s 细胞中提取总RNA，应用 sMAR 技术 ，构建以 pGAD1_7一Rec为载体的s 细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库。s 细胞总RNA的电泳谱型与哺乳动物总 RNA 存在差异 ，其28srRNA带弱于 18srRNA带 ，所合成的原始dscDNA大小为0．1～4kb。文库展现 良好的多态性， 载体质粒插人的cDNA片段大小大部分在0．3～2kb之问。s 细胞酵母 GAL4AD融合 cDNA文库的构建为草 地贪夜蛾功能基因的识别和鉴定，为研究杆状病毒与宿主细胞的互作机制提供了重要研究工具。 关键词：s 细胞；cDNA文库；草地贪夜蛾；酵母双杂交 ；昆虫细胞系 中图分类号：Q966 文献标识码：A 文章编号 ：1674 858(2009)0104lD5 C0nstructi0n0faVeastGAL4fusi0ncDNA librarvfr0m Sf9cells WANGChun．Miao，ZHONGXue．Ping，LIUPan—Feng，LILu—Lin (HubeiKeyLabomt0ry0fGenetic Regulation and IntegratiVeBiol0gy，College0fLifeSciences，HuaLzhongN0HIlalUniversity，W uhan 430o79．China) Abstract、IPLB—sf-9(Sf9)isacelllinederivedfr0mpu ovariantissue0fthefaU舢 ywo瑚 ， o- d叩e九z／ 咖e ，whichispe肿issivetoAcMNPVandotherbaculoviIuses，andiswidelyusedf0rpro- ductionoffuncti0nalproteinswith bacul0virusexpression vectors．A veastGAL4 fusion cDNA libr r frl0m S cellswasc0nstructed．TotalRNA 0fS cellswaspuri6edbvusingI zolreagents．ThecDNAs 0fthemRNAsc0ntained in thepuri6ed t0talRNA sanlp1eweresynthesizedbySMARTm techn0logy， whichweI．esubsequentlyclonedintotheplasmidpGADT7一Rec．Intherecombinantplasmids，thecDNA frlagmentsweI．efulsedwiththeyeastCAL4 activationdomain—enc0dingsequence．PCR pelf0珊 edtoex— aminepolymoI1)hism 0fthelibrarydetected cDNA inserts．whichweremainly0．3—2kbin size．The constmctedlibraryw0uldbeusefulf0ridentificationandchamcterization0ffunctionalgenesof．s． g— De，dⅡandf0rresearchininteracti0nbetweenvirusandhostcells． Keywords：Sf9cells；cDNAlibrary；却0a