玉米大斑病菌ISSR反应体系的优化和遗传多样性分析.pdfVIP

第35卷 第5期 植 物 保 护 学 报 V0I．35 No．5 2008年 10 月 ACTA PHYT0PHYIACICA SINICA 0ct． 2oo8 玉米大斑病菌 ISSR反应体系的优化 和遗传多样性分析 谷守芹 范永山 李 坡 董金皋h (1．河北农业大学真菌毒素实验室，保定 071001；2．唐山师范学院生命科学系，唐山063000) 摘要：以玉米大斑病菌基因组DNA为模板，采用单因素水平优化的方法对DNA聚合酶的来源及 浓度、引物浓度、dNTPs浓度、DNA模板浓度、rrm (退火温度)、PCR反应循环数等重要参数进行摸 索和优化，建立了玉米大斑病菌ISSR—PCR优化反应体系，并从40条 ISSR引物 中筛选 出9条多态 性较好的ISSR引物。对来 自河北、河南、辽宁等玉米主产区的44个菌株进行 ISSR分析表明，ISSR 标记在我国玉米大斑病菌中存在较高的多态性，多态性条带 占40．3％。聚类分析显示，在阂值为 0．8时菌株被分为7个类群。对 ISSR揭示的玉米大斑病菌的遗传多样性与菌株交配型、地理来源 之间的关系进行分析，结果显示菌株的遗传多样性与交配型间的关系密切，而与其地理来源无明显 相关性。 关键词：玉米大斑病菌；简单重复序列区间；影响条件；遗传多样性 OptimizationofISSR reactionandgeneticdiversity analysisofExserohilum turcicum GuShouqin FanYongshan_ LiPo DongJingao (1．MycotoxinLaboratoryAgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，HebeiProvince，China；2．Life ScienceDepartment，TangshanTeacher’SCollege，Tangshan 063000，HebeiProvince， China) Abstract：Bymeansofthesingle—factorexperimentsandusingDNA ofExserohilum turcicum asthetem— plate，asuitableISSR-PCR amplificationsystem wasestablishedandoptimizedintheTaqDNA polymer- asesourceandconcentration，primers，dNTPsconcentration，concentrationofDNA template，melting temperature(Tm)andthenumberofamplificationcycles．Amongthe40ISSRprimerstestedinthere— search，9polymorphicprimerswerescreenedtostudythegeneticdiversitybetween44isolatesofE．turci— cumcomingfromthemajoreOITlplantingareasinChina．40．3％ polymorphicbandswereamplifieda— mongthetestedisolates，indicatingthehighgeneticdiversityinthepopulationofE．turcicum inChina． Thedendrogram basedonISSRresultsrevealedthatthe44isolateswereclusteredintosevengroupsatthe thresholdofgeneticsimilarcoefficient0．8，whichprovedt