D3区序列分析.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(3)：254—261(2009) 马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA—D2／D3区序列分析 于海英 ，彭德 良 ，胡先奇 ，黄文坤 (中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193； 云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室，昆明650201) 摘要：我国危害甘薯的马铃薯腐烂茎线虫rDNA—ITS基因片段长度存在A型(900bp)和B型(1100bp)2个类型，A型腐 烂茎线虫群体的ITS片段比B型群体少200bp。为了进一步研究这2种类型群体的发育关系，本文用线虫通用引物D2A 和D3B对来自国内的21个马铃薯腐烂茎线虫群体和 1个韩国的马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA—D2／D3区进行 了PCR扩 增，均产生大小一致的片段，长度约为780bp，克隆、测序后用DNAMAN5．2软件和MEGA4软件进行分析比对 ，结果表明 我国21个马铃薯腐烂茎线虫群体28SrDNA—D2／D3区只有20余个碱基的差异，相似率达97．2％。基于UPGMA构建的 系统发育树很好地区分了马铃薯腐烂茎线虫A型和B型群体，展现出了群体的来源及发育关系。 关键词：马铃薯腐烂茎线虫；D2／D3区片段；序列分析 Molecularcloning and sequencesanalysisof28S rDNA--D2／D3 regionsofDitylen-— chusdestructoron sweetpotato in China YU Hai．ying一，PENG De—liang，HU Xian．qi。， HUANG Wen—kun (TheStateKeyLaboratoryforBiologyofDiseaseandInsectPests，InstituteofPlantProtection，Chi— neseAcademyofAgriculutralSciences，Beijing100193，China；KeyLaboratory ofAgriculturalBiodiversityandPestsControl， MinistryofEducation，YunnanAgriculutralUniversity，Kunming650201，China) Abstract：TwotypesofrDNA-ITS(TypeA，900bpandTypeB，l100bp)weredemonstratedtoexistin Di~lenchusdestructorpopulationsonsweetpotatoinChina．TheD2／D3regionsof28SrDNA rfom 22popu— lationsofD．desturctorwereamplifiedwithuniversalprimerpairsD2A andD3B．All22populationsyielded onesinglerfagmentabout780bp．Sequenceanalysisandalignmentwere conductedbyusing the software MEGA4andDNAMAN5．2andall22 sequencesweresubmittedattheGenBank．Theresultsshowedhtatse- quencedifferencesofD2／D3regionwereonlyinafew sites．andthatthesimi laritywas97．2％ ．Two types couldbedistinguishedinhtephylogeneticrteebyusingUPGMA method．Theevolutionaryrelationshipbe- tweentwotypesandtheoriginofDi~lenchusspecieswerediscussed． Keywords：Di~lenchusdesturctor；D2／D3expansionsegments；sequencesnaalysis 中图分类号：$435．31 文献标识码：A 文章编号：0412-0914(2009)03-0254-08 马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchusdestructor)是 变得困难，随着分子生物学技术的飞速发展，分子 我国重要的进境植物检疫性有害生物 ，在我国