玉米细菌性枯萎病菌PCR检测.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(4)：368-376(2009) 玉米细菌性枯萎病菌 PCR检测 王 赢 ，周 国梁。 印丽萍。，袁 平。，王文兵 ，易建平2 ， (江苏大学，镇江 212013； k海 出入境检验检疫局，上海 200135) 摘要：根据GenBank中玉米细菌性枯萎病菌及其近似种的16S序列差异 ，设计了一对玉米细菌性枯萎病菌特异性引物 Ps2r／Ps3r，该引物能从供试的7株玉米细菌性枯萎病菌中特异性扩增出一条286 bp的预期条带，供试的32株近似种菌株 都没有扩增产物；与国内外文献报道的其它5对特异性引物相比，除引物 PSA／PSB外，引物 DEP1／DEP2、ES16／ESIG2c、 HRP1d／HRP3c和 CPSLI／CPSR2c在不同程度上对部分近似种菌株出现了扩增。试验结果表明，引物 Ps2r／Ps3r和PSA／ PSB能特异性扩增玉米细菌性枯萎病菌，得到预期的扩增产物。对不同系列稀释度的DNA和玉米样品中病菌的检测结果 表明，由引物Psl／Ps4和Ps2r／Ps3r组合的巢式PCR方法的检测灵敏度高于引物 ITSA／ITSB和PSA／PSB组合的巢式PCR 方法，也高于Bio—PCR检测方法 ；前者可以检测到玉米种子中300cfu／sample的 目的细菌，该检测方法在进境玉米种子样品 玉米细菌性枯萎病菌的检疫中具有比较理想的应有潜力和推广价值。 关键词：玉米细菌性枯萎病菌；PCR；检测 PCR detectionofPantoeastewartiisubsp．stewartii WANGYing，ZHOUGuo．1iang，Y Li—ping ，YUAN Ping，WANG Wen-bing ，YIJian—ping (JiangsuUniversity，Zhenjiang212013，China； ShanghaiEntry—ExitInspectionnadQuarnatineBureau，Shanghai200135，China) Abstract：SevenstrainsofPantoeastewartifsubsp．stewartif(Pss)and32strainsofrelatedspecieswere usedtovalidatethespecificityoftheprimerPs2r／Ps3rdesignedfrom 16SsequenceofPssnadother5pairsof primersspecificforPss．TheprimerPs2r／Ps3randPSA／PSB couldamplifysevensrtainsofPssandget268 bpproduct，butnobandforohter32srtainsofrelatedspecies．Toacertainextent，theprimersDEP1／DEP2， ES16／ESIG2C．HRPld／HRP3cand CPSL1／CPSR2cproduced falsepositivema plification forthe srtainsof generaPantoeaandErwinia．ThenestedPCR combinedwiht primersPsl／Ps4 na dPs2r／Ps3rcoulddetectas low as300cfu／samplebacteriaofPssincornseedsma plewithbettersensitivityhtna thatwiht primersITSA／ ITSB orPSA ／PSB andconventionalBio．PCRmethod．Thismoreaccurateandsensitivedetectionmehtodfor Pssexhibitedpotentialroleinthequarantineofimportedcom seeds． Keywords：Pantoeastewartiisubsp．stewarti：PCR：detection 中图分类号：$435．131 文献标识码：A 文章编号：0412-0914(2009)04-0368-09 玉米细菌性枯萎病是由Pantoeastewartiisub． 地 。病菌通过种子进行远距离传播，在病区通 sp．stewar