11第11章医.ppt

第十一章 分子生物学技术的临床应用 上海交通大学 樊绮诗 四川大学 范 红; 1953年Watson 和Crick 提出DNA双螺旋结构 模型 1990年人类基因组计划正式启动 2001年2月科学家宣布完成人类基因组的全 部序列图; 分子诊断不仅能早期对疾病作出确切的诊断，也能 确定个体对疾病的易感性，判别致病基因携带者并 对疾病的分期、分型、疗效监测和预后作出判断 ? 分子诊断已成为实验诊断学的一个重要组成部分 ;第十一章 分子生物学技术的临床应用;第一节 标本来源;DNA或RNA 来自外周血、体液、分泌物和组织 如毛发、皮肤、肌肉、器官、肿瘤组织等 产前基因诊断标本： 　 羊水细胞 （16周～20周） 　 绒毛膜细胞 （7周～9周）;第二节 分子生物学技术在病原生物基 因组相关疾病研究和诊断中的应用;第二节 分子生物学技术在病原生物基因 组相关疾病研究和诊断中的应用;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;（一）结核分枝杆菌;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;1.生物学特性及致病性 HBV对外界环境的抵抗力较强，且传染性较强 输血或注射是重要的传播途径 HBV感染后潜伏期约2～6个月，HBV DNA在肝细胞内以游离DNA和整合到宿主细胞染色体的方式存在 HBV分为8个基因型，A～H型 ;2.乙型肝炎病毒核酸的检测 ; （2）支链DNA（bDNA）技术： 一种核酸探针杂交标志信号放大技术 。 优点：稳定性和重复性较好，结果准确，操作简单， 将待测病毒裂解释放核酸后变性为单链，即 可进行检测 。 缺点：敏感性较低、检测范围窄而不适用于低水平病 毒的检测 。;3.变异株与耐药突变检测 ;HBV耐药突变类型及其核苷酸、氨基酸变化 ;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;1.形态结构与致病性 HIV根据血清学反应和病毒核酸序列分为 HIV-1型、HIV-2型 HIV结构分为 包膜、核心 ;HIV直接或间接损伤CD4+T细胞 HIV抑制抗原递呈细胞功能 HIV诱发自身免疫性疾病及诱导细胞凋亡 HIV导致CD8+T细胞丧失抗病毒活性等 ; 原位杂交 PCR NASBA技术 bDNA技术 荧光定量RT-PCR技术 ;（四）SARS冠状病毒;SARS相关冠状病毒的检测 WHO推荐SARS-CoV特异性检测方法： 分子生物学检测 免疫学检测 细胞分离培养;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;（五）人禽流感病毒;（五）人禽流感病毒;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;一、感染性疾病的诊断和治疗监测;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;二、 耐药监测与分子流行病学调查;三、医院获得性感染的监测与控制;第三节 分子生物学检验技术在疾病研究 和诊断中的应用;第三节 分子生物学检验技术在疾病研究 和诊断中的应用;一、单基因遗传性疾病的基因诊断;（一）单基因疾病中常见的分子异常;一、单基因遗传性疾病的基因诊断; 1.点突变;一、单基因遗传性疾病的基因诊断;2.片段性突变;3.动态性突变;一、单基因遗传性疾病的基因诊断;（二）遗传性疾病基因诊断的策略;2.间接诊断策略;连锁分析(linkage analysis): 是通过用一系列覆盖密度适当的遗传标志在先证者家系中进行分析，从而找到与某一遗传标志紧密连锁的致病基因，并确定该基因在染色体上的位置 ;（三）基因诊断所采用的技术; 1.直接诊断所采用的技术;2.基因表达异常的检测;3.间接诊断所采用的技术; （2）小卫星序列 串联重复可变数目（VNTR），以 6～70bp 为单位，可重复数次至数十次，以串联形式排列，构成数量可变的串联重复序列。等位基因常常达10个以上，信息量比 RFLP大得多 。 检测方法：Southern 印迹技术、PCR技术 。 ;一、单基因遗传性疾病的基因诊断;一、单基因遗传性疾病的基因诊