抗HBc时间分辨荧光免疫分析法建立.PDFVIP

　临床检验杂志 2002 年第 20 卷第 5 期 　Chinese Journal of Clinical Laboratory Science ,2002 ,Vol20 ,No 5 　 291 ( ) 文章编号 :1001764X 2002 　　　中图分类号 :R4466 ;R5126 　　　文献标识码 :B 抗 HBc 时间分辨荧光免疫分析法的建立 ( ) 陈永伟 ,黄飙 , 肖华龙 ,谭成 ,朱利国 江苏省原子医学研究所核医学国家重点实验室 ,无锡 214063 ( ) 3 + 摘要 : 目的　用竞争法建立抗 HBc 时间分辨荧光免疫分析 TRFIA 方法 。方法 　以基因重组 HBcAg 包被板 , Eu - 异氰酸苄 ( 3 + ) 基二乙烯三胺四乙酸 Eu DTTA 标记抗 HBcIgG 单克隆抗体 ,建立抗 HBc TRFIA 方法 。数据采用 LogLogit 函数和四参 数 Logistic 函数数据处理程序处理 。结果 　方法的批内和批间变异系数分别为 2 30 %和 630 % , 回收率为 9672 % ,灵敏度 为 0 2 NCU/ ml 。本方法与抗 HBs 和抗 HBe 无交叉反应 ,Eu3 + 标记物稳定 6 个月以上 。结论 　TRFIA 是一种新的抗 HBc 免 疫检测技术 ,具有灵敏度高和稳定性好等优点 ,能够用于定量测定抗 HBcIgG 。 关键词 :时间分辨荧光免疫分析 ;抗 HBc ( ) 　　以往抗 HBcIg G 的检测主要以酶标记免疫分 白峰 ,经紫外吸收分析定量 146 A 280 - 0. 74 A 260 , ( ) ( ) μ 析 EIA 、放射免疫分析 RIA 和免疫放射分析 用上述洗脱液稀释抗 HBcIg G 至 2 g/ L 。取 500 l ( IRMA) 等为主 ,受方法学的限制 ,或定性为主 ,或 加入含 02 mg 的 Eu3 + N2[p异氰酸苄基]二乙 ( 3 + ) 存在放射性污染和稳定性差等问题 。本文以稀土离 烯三胺四乙酸 Eu D TTA 冻干粉的小瓶中 ,30 ℃ ( ) 子铕 Eu 为示踪剂建立抗 HBcIg G 时间分辨荧光 磁力搅 拌反应 20 h 。反 应 液 经 用 80 mmol/ L 、 免 疫 分 析 ( timeresolved fluoroimmunoassay , p H7 8 TrisHCl 缓冲液平衡的 Sepharose CL6B 柱 TRFIA) ,报道如下 。 ( 1 ×40 cm) 层析 ,A 280 监测收集蛋白峰 。 1 　材料与方法