利用反向遗传操作技术拯救重组新城疫病毒.pdfVIP

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2017-06-16 发布于山东
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利用反向遗传操作技术拯救重组新城疫病毒.pdf

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第4l卷第 10期东北农业大学学报 41(10)：73-76 2010年 10月 JournalofNortheastAg,iculturalUniversity Oct．2010 利用反向遗传操作技术拯救重组新城疫病毒郝景波，吴云舟，刘艾林，尹杰超，任桂萍，李德山 (东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030) 摘要：将新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)Anhinga株的全长cDNA的克隆质粒以及L、P、NP的表达质粒共转染稳定表达T7RNA聚合酶的BSRT7／5细胞，得到拯救病毒。通过RT—PCR扩增、酶切鉴定、测序验证拯救病毒中分子标签的存在，并通过血凝试验测定病毒的血凝效价、测定蚀王i王形成单位确定病毒滴度，从而证明病毒拯救成功。新城疫病毒Anhinga株的拯救成功为该病毒进行结构基因研究和疫苗研制奠定了基础。关键词：新城疫病毒；病毒拯救；共转染；反向遗传操作系统中图分类号：Q93 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)10—0073-04 Rescue ofrecombinantNewcastle disease virusby reverse genetic system／HAOJingbo，WUYunzhou，LIUAilin，YINJiechao，RENGulping，LIDeshan(Collegeof LifeSciences，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：Theplasmidofthefull·lengthNewcastlediseasevirus (NDV)cDNAfr0mAnhingastrain was cotransfected with helper plasmids encoding viral nucleoprotein， phosphoprotein and large polymeraseproteinintoBSRT7／5cellsstablyexpressingT7RNApolymerase．Theviruswasrescuedand amplified by inoculation ofthe supernatantfrOm the transfected cells into the allantoic cavity of specific-pathogen free chicken embryos．By RT-PCR amplification，restriction enzyme digestion and sequencingoc nfirmation，itidentifiedtheuniquemoleculartagoftherescuedvirus．VirusHAtiterwasalso measuredthroughthehemagglutinationtest(HAtest)，anddeterminedviraltitersbyplaque-formingunits． Thus．itconcludedthattheviruswasrescuedsuccessfuIlyfr0m cDNA．ThesuccessfulrescueofNDV Anhingastrainestablishedausefulplaftorm forthefurtherstudyofNDVanddevelopmentofreoc mbinant vaccines． Key words：Newcastlediseasevirus；virusrescue；cotransfection；reversegeneticmanipulation system 新城疫病毒 (Newcastlediseasevirus，NDV)属病毒的方法是近几年建立的，这种方法能够对负链副黏病毒科副黏病毒亚科的禽副