苏云金芽孢杆菌cry1Ac28基因的克隆及原核表达.pdfVIP

第41卷第 10期 东 北 农 业 大 学 学 报 41(10)：61-67 2010年 10月 JournalofNortheastA culturalUniversity 0ct．2010 苏云金芽孢杆菌crylAc28基因的克隆及原核表达 曲步云，李海涛，李 明，高继国 (东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030) 摘 要：研究旨在克隆苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)Q一12的crylAc28基因并在原核载体中表 达。应用PCR—RFLP法鉴定出Bt0—12中含有crylAc基因，根据 已知的crylAc全长基因序列设计特异引物，以 Bt0—12基 因组DNA为模板扩增crylAc全长基因，与大肠杆菌(Escherichiacoli)表达载体 pEB相连接获得含有 crylAc全长基因的重组质粒pEB—crylAc，经过序列分析表明，该基因编码区为3537bp，编码 1178个氨基酸， 分子质量为 1333176ku，pI为4．885，为弱酸性蛋 白质，亮氨酸 (Leu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)三种氨基酸含 量最高，分别为8．06％、7．80％、7．72％，该基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株能够正常表达 133_3176ku蛋白。该 基因核苷酸序列已在 GenBank中登录，登录号为FJ610439，并由Bt8一内毒素基 因国际命名委员会正式命名为 crylAc28。为进一步研究c~1Ac28蛋 白功能和活性打下了良好的基础。 关键词：苏云金芽孢杆菌；crylAc28；克隆；原核表达 中图分类号：Q785 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)10—0061—07 Cloning and procaryotic expression ofcry1Ac28 gene frOm Bacillus thuringiensis／QuBuyun，LIHaotao，LIMing，GAOJiguo(CollegeofLifeSciences，Northeast AgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：BacillusthuringiensisQ一12was identified to harbourcrylAcgene by PCR-RFLP． AccordingtothepublishedsequenceofcrylAcgene，apairofspecialprimerswasdesignedforfullength DNA cloningofcrylAcgenebyPCR amplification．Subsequently，theamplifiedfragmentofcrylAcgene wasinseKed intotheprocaryoticvectorpEBanda 133．3176kupeptidewasexpressed inEscherichicoil BL21(DE3)byIPTGinduction．ThegenewasregisteredinGenBankwithaccessionnumberFJ610439 and was designated as a novelgene，cry1Ac28，by InternationalNomenclature Committee ofBt． Sequenceanalysisresultsshowedthattheopenreadingframeofthecry1Acgenewas3537bpwhich coded 1178aminoacidsanditsplwas4．885．Intheamino，acidsserine，leucineandthreoninewerethe mostrich，withthecontentof8．06％，7．80％and7．72％，respectively．Theseresults