中矮1号梨砧木（S2）PGIP基因的克隆及序列分析.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(4)：462-466 JournalofFiuitScience 中矮 1号梨砧木 (S2)PGIP基因的克隆及序列分析 蒋 豪，汤浩茹 ，古英洪，张 勇，罗 娅 (四川农业大学林学园艺学院，四川雅安 625014) 摘 要 ：利用 RT—PCR技术 ，根据 GenBank中梨属 PGIP基 因序列设计 1对特异引物 ，以梨矮化砧木 Sz叶片总 RNA 为模板 ．克隆到 1条约 1100bp的cDNA片段 ，将其与 pMD18一Tvector连接后转化EscherichiacoliJM109，对筛选到 的阳性克隆进行序列测定并使用生物信息学方法对所得结果进行综合分析。结果表 明，克隆片段为梨 PGIP基 因，该 cDNA编码 330个氨基酸 ，预测分子量为 36388ku，第 1～24个氨基酸残基是信号肽 。与梨属其它种 中已获得 的 PG 核苷酸序列开放 阅渎框 (Openreadingflame，ORF)的同源性为 97．5％-99．6％，氨基酸序列 的同源性为 97．6％～ 99．1％。 关键词 ：梨( USSuriensis)；矮化砧木 ；基因克隆；PG 基 因；序列分析 中图分类号：$661．2 文献标识码 ：A 文章编号：1009—9980(2008)04—462—05 Cloningand sequenceanalysisofPGIP genefrom peardwarfstockS2 (Pyrusussuriensis) JIANGHao，TANGHao—rll，GUYing—hong，ZHANGYong，LU0Ya (CollegeofForestryandHorticulture，SichuanAgriculturalUniversity，Ya’an，Sichuna625014China) Abstract：A 1038bpsequenceofpolygalacturonase—inhibitingprotein (PG ’)gene (GenbankAccessionNumber： EU107274)wasobtainedfrom ’ ussuriensisbyRT—PCRusingapairofspecificpfime~．PCRproductwasclonedinto pMD18一TvectorandthentransformedintoEscherichiacoliJM109．Positivecloneswerepickedoutandsequenced．There— sultsrevealedthat LPGIPencodesa330aminoacidproteinwithapredictedmolecularweightof36388ku．Thepredicted signalpeptidewasformedby24residuesrfom 1to24．Th eclonedcDNA exhibitsahomologyoftheopenreadingframe (ORF)ofthenacleotideanddeducedaminoacidsequencesof97．5％to99．6％and97．6％to99．1％，respectively． Keywords：Pear( ussuriensis)；Dwarfstock；Cloning；Polygalacturonase—inhibitingprotein(PG )gene；Sequence analysis 植物富含多糖 的细胞壁是抵抗病原真菌侵染 S2Pyr113ussuriensisMaxim．)为试材 ，克隆其 PGIP基 的屏障l1]。植物致病性真菌在侵染植物 的过程中必 因，并分析其序列，为探索梨 PGIP基因功能和梨抗 须首先分泌包括多聚半乳糖醛酸酶 (polygalaetur— 病育种奠定基础。 onase)在 内的酶来降解植