结球甘蓝花粉膜联蛋白基因的克隆及其表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （8 ）：1567 –1574 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 结球甘蓝花粉膜联蛋白基因的克隆及其表达分 析 * * 孙梓健，许俊强，宋 明 ，韦静宜，汤青林，王志敏，王小佳 （西南大学园艺园林学院，重庆市蔬菜学重点试验室，南方山地园艺学教育部重点试验室，重庆 400715 ） 摘 要：对结球甘蓝（Brassica oleracea L. var. capitata L. ）花粉总蛋白双向电泳及差异蛋白质谱分析， 发现膜联蛋白在花粉萌发后较萌发前表达下调。通过同源扩增和 RACE 等方法首次在结球甘蓝花粉中扩 增得到 BoAnnexin2 基因的 cDNA 序列，该基因 cDNA 全长 1 157 bp，开放阅读框为 951 bp，编码 316 个 氨基酸残基，预测分子量为 36.02 kD，等电点 6.33 。BoAnnexin2 编码蛋白 C 端有 4 个膜联蛋白重复序列， 共 2 个Ⅱ型钙结合区域，在第 4 个钙结合区位点包含 GXXXGXS （T ）/DXXG 基序。实时荧光定量试验 表明，BoAnnexin2 在甘蓝成熟未萌发花粉中的表达量是萌发 45 min 后表达量的 8 倍，表明 BoAnnexin2 在 甘蓝花粉萌发起始阶段起到重要调控作用。 关键词：结球甘蓝；花粉；膜联蛋白 中图分类号：S 635.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）08-1567-08 Molecular Cloning and Expression Analysis of Annexin Gene from Cabbage * SUN Zi-jian，XU Jun-qiang ，SONG Ming ，WEI Jing-yi ，TANG Qing-lin，WANG Zhi-min ，and WANG * Xiao-jia （College of Horticulture and Landscape Architecture，Southwest University ；Chongqing Key Laboratory of Olericulture； Key Laboratory of Horticulture Science for Southern Mountainous Regions ，Ministry of Education ，Chongqing 400715 ， China） Abstract ：Plant annexins constitute a multigene family having suggested roles in a variety of cellular processes. We have isolated and characterized an annexin cDNA of cabbage （Brassica oleracea L. var. capitata L. ）gene （BoAnnexin2 ）encoding annexin proteins using RT-PCR and RACE-PCR after 2-D electrophoresis of cabbage pollen total proteins，which found that annexin protein was downregulated when pollens were germinated. The BoAnnexin2 gene was