鱼藤酮多克隆抗体的制备和残留分析方法.pdfVIP

维普资讯 第35卷 第3期 植 物 保 护 学 报 Vo1．35 No．3 2008年 6 月 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA June 2008 鱼藤酮多克隆抗体的制备和残留分析方法 张信旺 徐汉虹 江定心 刘顺字 (华南农业大学昆虫毒理研究室 ，天然农药与化学生物学教育部重点实验室，广东 广州 510642) 摘要：为建立鱼藤酮免疫分析方法，以鱼藤酮为原料合成4一{2一[(2R，6as，12as)一l，2，6，6a，12，12a 一 六羟基一2一异丙烯基 一8，9一二甲氧基色烯 (3，4_b)喃(2，3-h)色烯一6一亚基]肼基}一4一丁 酸(简称鱼藤酮腙琥珀酸半酯，RH．HS)半抗原，通过碳化二亚胺法 (EDC)、活酯法(AE)将半抗原 与牛血清蛋 白(BSA)偶联制备免疫原 I、Ⅱ。将免疫原分别免疫BALB／c鼠获得相应的抗体 I和 抗体I1，测定抗体冻干粉效价，分别为4．10×10和8．29×10。并进行抗原抗体的竞争抑制能力、 特异性和鱼藤酮的添加回收试验。结果表明：抗体 I、Ⅱ对鱼藤酮最低检测限(Ic加)分别为0．440 g／mL和0．437 g／mL。两抗体对吡蚜酮、克百威的交叉反应率均小于1．1％，抗体 I对4个与鱼 藤酮结构相类似化合物的交叉反应率均高于56％，较抗体 Ⅱ高。鱼藤酮的免疫分析技术(ELISA) 与HPLC检测手段相 比，在检测线性范围和灵敏度方面，两者差异不明显；在样品前处理方面， ELISA显示出快速、简单、有效的优点。 关键词 ：鱼藤酮；半抗原 ；抗体 ；酶联免疫吸附测定 Preparationofpolyclonalantibodiesandresidueassayforrotenone ZhangXinwang XuHanhong JiangDingxin LiuShunzi (LabofInsectToxicology，KeyLabofNaturalPesticideandChemicalBioloyg，MinistryofEducation， SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou 510642，GuangdongProvince，China) Abstract：Inordertoestablishtheimmunoassaymethodofrotenone，thehapten4一{2_[(2R，6as， 12as)一1，2，6，6a，12，12a—hexahydro一2一isopropenyl一8，9一dimethoxychromeno(3，4一b)furo(2，3-h) chromen-6一ylidene]hydrazinyl}-4一oxobutanoicacid(RH—HS)wassynthesizedfromrotenone．Thehapten wasconjugatedtobovineserumalbumin(BSA)，withthel—ethyl一3—3一dimethylaminopropylcarbodiimide (EDC)methodandactiveester(AE)methodtoprepareimmuneogenIandimmuneogenII．Corres— pondingantibodieswerepreparedthroughtheimmuneogensinBALB／cmouse．Titersofantibody Iand antibody I1were4．10×10 and8．29×10 ，respectively．Withtheexperimentsabouttheaffinity。spe— cificityofan