粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌δ-内毒素的酶解活化作用.pdfVIP

维普资讯 第35卷 第 3期 植 物 保 护 学 报 Vo1．35 No．3 2008正 6 月 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA June 2008 粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌 j6i一内 毒素的酶解活化作用 徐 健 刘 琴 姚 远 王明明 祝树德H (1．扬州大学园艺与植物保护学院，扬州 225009；2．江苏里下河地区农业科学研究所 ，扬州 225007) 摘要：粘虫颗粒体病毒(Psedualetiaunipunctagranulovirus，PuGV—Ps)对苏云金杆菌(Bacillusthuring— iensis，Bt)具有增效作用。为明确其增效机制，采用SDS．PAGE方法研究PuGV—Ps对 Bt6一内毒素 的降解活化作用。结果表明，碱性条件下晶体蛋 白和PuGV．Ps共同孵育，130kD的6一内毒素被进 一 步酶解为分子量为 ll0、87、61、47kD等多种不同的肽链，其酶解活化程度随缓冲液pH的升高不 断加深，在pH值 10．7的0．1mol／LNaCO，缓冲液中，6一内毒素完全降解，并产生具有一定抗蛋 白酶继续降解的分子量为47、60和61kD的活性片段。用氨苯磺胺偶氮酪蛋 白为底物测定PuGV— Ps中总蛋白酶活性的结果表明，PuGV—Ps在 pH值为7．38～10．38时均具有蛋 白酶活性，且蛋 白酶 活性随pH升高而显著提高。4种蛋 白酶抑制剂均可抑制PuGV—Ps的蛋白酶活性，且以STI的抑制 作用最强。SDS—PAGE试验同样显示了STI可以抑制PuGV—Ps对6一内毒素的酶解活化。 关键词：粘虫颗粒体病毒；苏云金杆菌；6一内毒素；酶解活化 EffectofPsedualetiaunipunctagranuloviruson thedegradation of6-endotoxinfrom Bacillusthuringiensis XuJian· LiuQin YaoYuan WangMingming ZhuShude (1．CollegeofHorticultureandPlantProtection，YangzhouUniversity，Yangzhou 225009，JiangsuProvince， China；2、AgriculturalInstituteofLixiaheArea，Yangzhou 225007，JiangsuProvince，China) Abstract：Psedualetiaunipunctagranulovirus(PuGV—Ps)canenhancethetoxicityofBacillus thuring— iensis(Bt)tolepidopterouspests．Inthisstudy，theeffectofPuGV—Psonthedegradationof6一endotoxin from Btwasdemonstrated．SDS—PAGE analysisshowed thata largeamountofactivated toxin proteins wereyieldedrfom 6一endotoxinofBtincubatedwithPuGV—Psunderalkalinecondition．6一endotoxinwith molecularweightsabout130kDwasdergadedinto47kD to110kD toxicproteinfragments．pH valuein— fluencedthedegradationeffectgreatly，whichelevatedalongwit