第5章植物细胞制药(一).pptVIP

第五章植物细胞工程制药 植物细胞培养与细胞工程 植物细胞工程制药第一节 序言 基本概念 植物细胞的全能性：植物体中任何一个具有完整细胞核（完整染色体组）的细胞，在一定条件下都可以重新再分化形成原来的个性。 植物的分化（differentiation）可以分为胚胎发生和器官发生两个阶段。前者是从精子与卵细胞结合开始，分化为幼胚进而发育为成熟胚和种子；后者是种子在适宜的条件下萌发，形成根、茎、叶、花和果实。 脱分化（dedifferentiation)：已经分化的细胞、组织和器官在人工培养的条件下又变成未分化的细胞组织的过程。 再分化（redifferentiation)：通过脱分化诱导形成的愈伤组织在适宜的培养条件下可再分化成为胚状体或直接分化出器官。①由体细胞或性细胞通过脱分化形成胚状体；②这愈伤组织直接形成胚状体。上述两种途径都可进一步发育成同母体相同的植株，即植物细胞全能性。 外植体（explant）：是指用于植物组织（细胞）培养的器官或组织（的切段），植物的各部位如根、茎、叶、花、果、穗、胚珠、胚乳、花药和花等均可作为外植体进行组织培养。 无性繁殖系（clone）又叫克隆，在植物细胞工程中是指使用母体培养物反复进行继代培养时，通过同一外植体而获得越来越多的无性繁殖后代。 同一无性系分离出来的两个或多个不同的系列，称为无性系的变异体。 次级代谢作用和次级代谢产物 植物细胞与组织培养 植物细胞的结构特征 第四节 植物细胞培养基本技术一、 植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术一、植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术一、 植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术一、 植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术一、 植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术一、 植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术一、 植物材料的准备 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 无机盐的影响 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 蔗糖的影响 1 蔗糖的影响 2 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 激素的影响 NAA 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 激素的影响 BAP 植物组织和细胞培养物的生长过程主要取决于生长素和分裂素的比例。 高浓度生长素和低浓度分裂素刺激细胞分裂；而低浓度生长素和高浓度分裂素则刺激细胞生长。 极个别植物组织含有合成足够和量内源植物激素的能力；绝大多数植物组织和细胞培养基加入一定量的植物生长调节剂。少数培养物在经历了多次继代培养后也可能自发成长为激素自养型（不稳定表型），此类组织的优点是其生长率高和费用低。 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术二、培养基 第四节 植物细胞培养基本技术三、培养方法 1. 固体培养 包括利用琼脂作为支技物的固体培养和固定化细胞培养。 特点：简便易行、培养所占空间小 缺点：培养条件不均一，易堆积有害代谢物，难以控制和检测 常用固化剂：琼脂、藻酸盐、角叉藻聚糖、明胶、羟乙基纤维素、聚丙烯酰胺、淀粉和硅胶等。 第四节 植物细胞培养基本技术三、培养方法 2. 液体培养 一种外植体经过一定次数的继代培养，待愈伤组织变得较为疏松时，其培养物就可用于悬浮培养。 液体培养系统包括小规模的悬浮培养和大规模的成批培养、半连续和连续培养。悬浮培养可分为静止和振荡两类。 静止培养简便易行，而且不会出现营养物质浓度差的现象。 振荡液体培养，是使悬浮细胞在液体培养基中，利用磁力搅拌或摇床在不断振（摇）动的情况下进行培养，此法可克服静止培养的许多缺点。 1.成批培养法 将培养基一次性加入反应器中，接种、培养一定时间后收获细胞的操作方式称为成批培养法。 最适于植物细胞培养的生物反应器当属气升式反应器，它用通气代替搅拌，避免了使用机械搅拌所致的细胞破碎、通气受限制、培养物易污染等缺点。 植物细胞两步培养法：第一个反应器用于细胞生物量的累积，第二个反应器用于次级代谢产物的生产。（实例：紫草宁） 2. 半连续培养法 在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培养方