ELISA试剂影响因素与常见问题分析.docxVIP

ELISA试剂影响因素和常见问题分析  TOC \o 1-3 \h \z \u   HYPERLINK \l _Toc376201223 1. 标本及采集、运输因素  PAGEREF _Toc376201223 \h 1  HYPERLINK \l _Toc376201224 2. 试剂的影响  PAGEREF _Toc376201224 \h 2  HYPERLINK \l _Toc376201225 3. 操作技术的影响  PAGEREF _Toc376201225 \h 3  HYPERLINK \l _Toc376201226 4. 显色和比色  PAGEREF _Toc376201226 \h 5  HYPERLINK \l _Toc376201227 5. HOOK效应影响  PAGEREF _Toc376201227 \h 5  HYPERLINK \l _Toc376201228 6. 干扰物质的影响  PAGEREF _Toc376201228 \h 5  HYPERLINK \l _Toc376201229 7. 药物的影响  PAGEREF _Toc376201229 \h 6  HYPERLINK \l _Toc376201230 8. 抗原自身因素  PAGEREF _Toc376201230 \h 6  HYPERLINK \l _Toc376201231 9. 异常结果分析  PAGEREF _Toc376201231 \h 7  HYPERLINK \l _Toc376201232 9.1 白板  PAGEREF _Toc376201232 \h 7  HYPERLINK \l _Toc376201233 9.2 显色弱、灵敏度低  PAGEREF _Toc376201233 \h 7  HYPERLINK \l _Toc376201234 9.3 灵敏度过高、板底高、背景高  PAGEREF _Toc376201234 \h 8  HYPERLINK \l _Toc376201235 9.4 假阳性  PAGEREF _Toc376201235 \h 8  HYPERLINK \l _Toc376201236 9.5 重复性差  PAGEREF _Toc376201236 \h 9   由于ELISA（酶联免疫实验）具有灵敏度高、特异性好的特点，已广泛应用于各种传染性疾病的筛查如肝炎、艾滋病、优生优育等。虽然洗板只是ELISA实验重要环节中的一个，但作为专业的洗板机生产厂家，我们必须对影响ELISA实验结果各因素有一定的认识。优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。如不注意，就容易出现白板、花板、色弱和假阳性等现象。尤其是花板现象（就是空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却明显偏高）是各个厂家洗板机调试中经常遇到的问题。现将ELISA实验操作中注意事项总结如下，以期给大家带来一些启发，以改善洗板机的安装调试水平，提高临床检测质量。 标本及采集、运输因素 严重溶血，以HRP为标记的ELISA测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶催化活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯内不易洗净；如有细菌污染，军体内可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不干净、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。 血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。一般来说，在5天内测定的血清标本可放置在4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的标本需要在-20℃保存。冻结血清溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不匀，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清应先离心或过滤，澄清后在检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冷冻；最好使用一次性玻璃试管或真空管采血；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶的活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂