第三节免疫检测的基本原理试卷.ppt

ICA——间接法测抗体 ICA 结果观察 阳性 阴性 无效 IFA与ICA的比较 IFA ICA 试剂形式 渗滤装置及附加试剂 试剂条 试剂保存 4~8℃ 6个月 室温一年 操作步骤 3~5 1 观察时间 3 min 3~20 min 阳性反应颜色浓度 操作结束颜色不变 颜色逐渐加深 IFA 穿流（FLOW THROUGH） ICA 横流（LATERAL FLOW） 1、 罗立新, 缪珑, 潘力, 等. 快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究[J]. 中国卫生检验杂志, 2006, 16(2): 154-156. 2、 赖卫华, 熊勇华, 陈高明, 等. 应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究[J]. 食品科学, 2005, 26(5): 204-207. 3、 谌志强, 段惠莉, 王新为, 等. 大肠埃希菌O157:H7的胶体金免疫渗滤法检测[J]. 中国公共卫生, 2005, 21(4): 705-706. 4、 谢昭聪, 宋志强, 吕敬章, 等. 应用胶体金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研究[J]. 中国国境卫生检疫杂志, 2005, 28(3): 163-165. 5、 王中民, 李君文, 王新为, 等. 免疫金渗滤试验检测食品中沙门氏菌的研究[J]. 微生物学免疫学进展, 2001, 29(4): 45-47. 6、刘永德, 汪毅, 陈禹雷, 免疫金探针快速检测禽流感病毒研究[J]. 上海交通大学学报: 农业科学版, 2005, 23(3): 321-324. 斑点金免疫渗滤试验 A D C B 阴性（未怀孕） 阳性（怀孕） 加尿样 除去滤器 加胶体金标记抗体 加洗涤液 结果判定 免疫印迹法图解 SDS裂解病毒 聚丙酰胺凝胶电泳 - + 95 68 45 12KD 电转印至NC膜上 置待测血清中，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗； 加底物 显色 120 41 24KD 第四节 放射性核素标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 R：放射性核素示踪 高灵敏 不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号 (标记物的放大效应) I：免疫学反应 高特异 废除以往沿用的无机或有机试剂，代之以抗体为结合剂 常用标记方法 1、常用放射性核素 2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法） 直接法（氯胺T法） OH -NHCHONH- CH2 OH -NHCHONH- CH2 Na125I 4。C 125I 氯胺T 间接法（连接法） CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 + Na125I 氯胺T 125I NSHPP 间接法（连接法） CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 CH2 OH H-C-C-N-蛋白质 H O H + NH2-蛋白质 125I 125I 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析 2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg） 结合相 游离相 放射免疫分析法的原理与方法 β液闪仪 γ计数器 化学发光标记免疫技术 直接化学发光 酶促化学发光特点 电化学发光特点 标记免疫分析三方式与四环节 三个方式 A、直接法 B、间接法 C、夹心法 四环节为： 1、抗体生产 2、 标记试剂制备 3、 分析方式设计 4、分析信号检测 免疫测定分类 均相免疫测定 HOMOGENOUS IA 在测定中结合的反应物(B)与游离的反应物(F) 不需要分离 异相免疫测定 HETEROGENOUS IA 在测定中需要分离(B)和(F) 小结 常用免疫测定方法 标记免疫法测定的方法及原理 标记免疫测定法的特点 ELISA的方法及原理 作业 1、何谓沉淀反应？何谓凝集反应？其抗原有特点？ 2、抗原抗体反应有何特性？ 3、抗原抗体反应的影响因素有哪些？ 4、常用的免疫标记技术有哪些？ 5、设计一ELISA试验来检测牛奶中黄曲霉毒素M1。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我