电泳仪器操作课2012.pptVIP

电泳仪器操作;主要内容;电泳原理;电泳的分类;电泳的分类;电泳的分类;单向与双向电泳条带比较;电泳实验过程;仪器一、电泳仪;毛细管电泳仪;梯度电泳仪(用于土壤微生物的分离）;生物分析仪（微流控芯片电泳仪）;2、操作方法 这里以我们实验室常用的北京六一仪器厂生产的DYY-12型电脑三恒多用电泳仪为例说明。 U、I、P的有效输入范围： U：4-1000v（常压电泳仪） I： 4-500mA P：4-300w 可以同时连接4组电泳槽（并联），此时应选择稳压输出，当接多个电泳槽时，则仪器显示的电流数值为各槽电流之和。;（1） 设置工作程序 方法有三种： ①用键盘输入新的工作程序，主要使用该方法（见后边介绍）。 ②按〔读取〕 键，取出保存在0中的上次工作程序，然后按确认键。（该电泳仪默认保存上次程序） ③按〔读取〕、〔 0-9〕、〔确定〕键，取出保存在(0-9)中的工作程序。取出保存的程序，必须检查一遍，确认无误后才可启动仪器工作。 ;（2）按键操作;C、﹝清除﹞键：可以清除有反显提示的参数数值。如果输入错误，可以按﹝清除﹞键，再重新输入。 D、﹝启动﹞键：确认参数无误后，启动电泳仪输出程序。 E、 ﹝+﹞键：在输出情况下递增反显U、I、P、T的数值；每按一次递增一个数字，弱按住不放，则连续快速递增。 F、﹝-﹞键：在输出情况下递减反显U、I、P、T的数值；每按一次递减一个数字，弱按住不放，则连续快速递减。 G、﹝继续﹞键：当电泳过程中出现人为中断停机，并希望继续接着输出工作，可以按﹝继续﹞键，此后电泳仪接着前面的工作时间继续工作。 工作结束时，仪器显示“End”，并连续蜂鸣提示，此时可按任意键止闹。关掉电源，拔出电源连接线。;（3）电源参数设定原则;显示屏;3、电泳仪使用注意事项 ①严禁将电泳槽放在电泳仪顶部，避免缓冲液洒进仪器内部。 ②电泳前，禁止将电泳槽附带的电源导线连接到电泳仪电源上。 ③勿用有机溶剂清洁面板。 ④本仪器工作时电压较高，使用中应避免接触输出回路及电泳槽内部，以免发生危险。;仪器二、电泳槽;水平电泳槽;垂直电泳槽;电泳槽种类;2、水平板电泳槽主要结构 主要由装有铂丝电极和缓冲液的主槽、凝胶托盘、试样格（梳子）、挡板与电泳导线组成。 3、水平板电泳槽（DYCP-33A型）使用方法 ①先把凝胶托盘放在平台上，把挡板插入槽中。将融化的琼脂糖溶液冷至 55 ℃ ，用少量琼脂糖凝胶将玻璃板封边，放置样品梳。接着将融化的琼脂糖凝胶溶液不间断地倒在模子中（厚度依样品浓度而定，须注意避免气泡混入） , 室温下自然凝固。 ;②待凝胶聚合后，轻轻拔掉挡板和梳子。注意先拔一侧，垂直拔出会使胶孔产生真空，导致部分凝胶被带出。把凝胶托盘移入电泳槽，加入缓冲液，使凝胶全部被浸没。（注意：加样孔靠近负极一端） ③在梳井内加样，注意避免引入气泡；枪头不能插入太深，防止穿透胶块。 ④盖好上盖，连接电泳仪电源与电泳槽之间的电泳导线。 ⑤注意不要接错正负极，检查无误后接通电泳仪电源。根据凝胶板的薄厚选择适宜的电压与电流。;⑥当溴酚蓝指示剂前沿到达胶的底部3/4处时停止电泳。电泳实验结束先关闭电泳仪电源；随之拔除电泳导线，然后打开泳槽上盖，取出凝胶托盘。 ⑦将凝胶移至染色区的通风橱内用EB染色液染色10～20分钟，然后将胶片转移至冲洗盘，冲洗掉多余的EB染色液，再转移到海绵上，进行两次彻底的吸水，直至胶片上没有水痕时，用保鲜膜包裹胶片，转移至凝胶成像仪中进行凝胶成像。 ;4、水平板电泳中常见问题与注意事项 ①染色必须在电泳结束后，在染色区进行，禁止在电泳槽内加EB染色液。 ②分不清正负极，导致样品跑到缓冲液中。红色为正级、黑色为负极，样品从负极跑向正极，加样孔靠近负极一端。 ③加样时枪头不能插入太深，防止穿透胶块，刚刚插入即可。 ④制胶浓度必须根据marker要求的浓度制备，否则小分子物质很容易跑出胶块。 ⑤在没有经验的情况下，最好设置定时，否则由于疏忽样品就可能跑出胶外。 ⑥缓冲液问题。样品必须完全溶解于上样缓冲液中（TE），否则不能在凝胶中移动；制胶和实际电泳采用同种缓冲液（TAE）；缓冲液加到凝胶上之后才能点样。;垂直电泳整个操作过程 制胶—灌胶（不连续电泳：灌分离胶—加蒸馏水—灌浓缩胶）—插入试样格—加缓冲液（上、下两部分）—拔掉试样格—加样品—盖上盖子，接通电泳仪电源—染色—脱色。 ;JY-SCZ8型垂直板电泳槽使用方法 ;1、使用去污剂将凝胶玻璃板反复擦洗晒干，再用无水乙醇擦净表面。 2、制胶时，首先挑选适合凝胶厚度的电泳玻璃，采取凹形玻璃板（简称凹板