快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究论文.docVIP

　　快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究论文 贝伟剑，郭姣，胡因铭，黄利华，胡旭光，曹扬 【摘要】 目的 研究快速筛选调节肝脂酶活性中药成分的方法。方法 利用大鼠肝组织匀浆和比色法检测肝脂酶(HL)活性，观察不同实验条件及中药成分对 HL活性的影响。结果 正常大鼠肝组织匀浆具有明显的HL酶促动力学特性，其HL脂解活性有明显Ca2+依赖性.freel Chinese medicine regulating hepatic lipase activities.Methods Rat liver homogenate and colorimetric assay of hepatic lipase (HL) activities edicine on hepatic lipase activities.Result It ogenate of SD rats demonstrated significant enzyme kiic properties of HL. Its lipolytic activities odulin antagonist promethazine hydrochloride,consistent atic kiic properties of purified HL reported in the literature. Oleanolic acid and ginsenosides Rb2 ethod for rapid screening of the active ingredient of Chinese medicine regulating HL activities by using rat liver homogenate in bination etric assay of HL activities ple and reliable,and could be used in .rapid screening of lipidloedicine having effects on HL activities,and screening of active ingredients that might increase HL activities from effective recipes of traditional Chinese medicine. Key ogenate; Fufang Zhenzhu Tiaozhi Fang(FTZ) recipe;hepatic lipas activator 肝脂酶(hepatic lipase,HL)是重要的脂代谢酶，其合成、分布、活性的变化和高脂血症、脂肪肝、动脉粥样硬化等密切相关。肝组织和血浆中HL酶活性的降低，可引起高脂血症1-3，并在脂肪肝发病中起重要作用4，5。 复方贞术调脂方(简称FTZ)由女贞子、丹参、三七、黄连等中药组成，含有齐墩果酸、三七皂苷、黄连素、丹参素等活性成分，在临床应用和实验研究中发现该方不仅具有明显的降低总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)及升高高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的作用,并能升高血浆HL活性、抑制动脉粥样硬化(AS) 形成、抑制脂肪肝形成等作用6，7，还能使饮食性高脂血症模型大鼠降低的肝组织和血浆中HL的活性恢复至正常水平7。 为了研究中药降血脂的物质基础和筛选新药，本研究以HL为靶点，以FTZ组分为调节HL活性成分的筛选对象，研究建立一种采用大鼠肝匀浆比色法测定肝脂酶活性，快速筛选调节HL活性中药有效成分的方法，现报道如下。 1 材料与仪器 1.1 材料与试剂 FTZ提取物 称取FTZ处方药材(由女贞子、丹参、三七、黄连等按2∶1∶0.5∶0.5质量比组成)，置圆底烧瓶中，加70%(φ)乙醇8倍量，浸泡0.5 h，加热回流提取1.5 h，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，浓缩液备用;药渣加水8倍量，加热回流提取1.5 h，滤过，浓缩，合并浓缩至3 g生药/g浸膏,临用时用0.1 mmol/L TrisCl缓冲液溶解稀释至相应浓度。 三七总皂苷、人参皂苷Rb2、齐墩果酸、盐酸小檗碱、丹参素由中国药品生物制品检定所提供;总脂酶试剂盒(南京建成生物工程研究所);大鼠肝脂酶的ELISA测定试剂盒(武汉中美科技);磷酸盐等试剂均为国产分析纯试剂; 盐酸氯丙嗪(Sigma公司);十二烷基硫酸钠(SDS)、二硫代苏糖醇(DTT)(Amresco)。 1.2 实验动物 Spague Daol/L TrisHCl( pH=9.5)在冰水浴中制成10%(1 g/10 mL)的匀浆,组织匀浆至显微镜下无完好细胞，低温下8 000 r/min离心5 min