仪器分析实验薄层色谱4.6介绍.ppt

色谱法用途与分类 薄层色谱法 薄层色谱基本原理 薄层色谱基本特点 薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理 吸附薄层色谱的吸附剂 展开剂的选择 比移值(Rf值)的求取 实验二 硅胶粘合薄层的活度测定;;薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC); 薄层色谱基本原理 薄层色谱（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，它是将固定相均匀地涂在薄板（如玻璃板）上，依靠毛细作用力或重力，使流动相通过固定相的一种色谱。 ;特点： 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。 试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高。 ;薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理 ;吸附薄层色谱的吸附剂;吸附薄层色谱的展开剂(流动相)洗脱能力 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 ;吸附薄层色谱的展开剂（混合剂） 先用单一溶剂展开， 若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，（如乙醇、丙酮等）， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。 ;定性参数1; 实验二 硅胶粘合薄层的活度测定  一、实验目的 1．掌握粘合薄层的制备方法。 2．了解粘合薄层活度测定方法。 二、实验原理 硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用Stahl（斯塔尔）活度测定法，以二甲黄、苏丹红G、靛酚蓝各40mg，溶于100ml挥发性溶剂中，滴加于薄层上，用石油醚展开10cm，应不移动，如改用苯展开则应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红0．19（？），靛酚蓝0．08，展开时间约为30—40分钟，经本法测定合格的硅胶薄层其活度与柱色谱法所定活度的Ⅱ一Ⅲ级相当。; ; 四、操作步骤1．粘合薄层板的铺制：  称取羧甲基纤维素钠(CMC—Na) 0．75g，加入100ml水中加热使溶解，放冷，放置后取14ml,再分次加入硅胶5g，调成糊状后倒在清洁的玻璃板上，可幌动或转动玻板，使其均匀流布于整块玻板上，而获得均匀的液层。将玻璃平放晾干，然后于110℃活化40分钟，置干燥器中贮存备用。;2．点样： 取羧甲基维纤素硅胶板一块(7．5×15cm)在距板一端lcm处，用铅笔轻轻划一直线作为起始线，在起始线中点用铅笔作一标记(o)，用内径约lmm的平口毛细管点加混合溶液，其直径应为2—3mm。 ; ;4 计算比移值（Rf）：; 五、注意事项 1．活化后薄层板应贮于干燥器中，以免吸收湿气而降低活性。 2．点样量不宜太多，否则会拖尾分离不好。 3．展开剂苯中含水量的多少会影响Rf值，故须用于燥的苯和器皿。 4．展开剂不要加得过多，起始线切勿浸入展开剂中 ; ;薄层色谱操作方法要求;五十年代中期，斯塔尔（Stahl）发展了一种新型的色谱分析技术——薄层色谱法。他在研究植物细胞组成的过程中，探索了高灵敏度的微量分离方法，详细地研究了以往的微量色谱技术，并将依斯迈洛夫提出的色谱方法中的仪器、吸附剂以及操作条件等标准化，使这一方法进一步发展成为一种新的色谱分析技术。斯塔尔称这种方法为“薄层色谱法”（简称TLC）。;展开剂 选择原则：根据被分离物质的极性 Stahl简图：极性物质—活度低（活性级大）的吸???剂--极性展开剂