薄层板的实验技.pptVIP

 一、薄层色谱的特点和基本原理 1.薄层色谱法 薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而分离的方法。 2.薄层色谱法原理 薄层色谱将固定相涂铺在载板上，使之形成均匀的薄层。被分离的样品溶液点加在薄层板下岩的位置，再把下沿向下放入盛有流动相的密闭缸中进行色谱展开，实现混合组分分离。被展开的组分斑点即色谱谱带。 二、薄层色谱的实验技术 1.薄层板的制法； 2.薄层色谱活化； 3.薄层色谱点样； 3.薄层色谱展开； 4.薄层色谱显色与分析； 1.薄层板的制法 （1）配置优质的CMC（缩甲基纤维素）溶液 取50g纤维素钠，在搅拌状态下加入到5000ml水中，强力摇匀，放置备用。使用时用300目丝网过滤，所得到的滤液即是优质CMC溶液。 （由于cmc溶液在水溶液中溶解速度很慢，放置两周或者更长的时间才可以溶解完全。可以采用一次性配置较多的溶液，留待以后多次使用。）尽管放置较长时间，CMC胶粒也无法完全溶解，所以采用300目丝的滤网过滤除去胶团 由于GF254硅胶为260-280 目，所以用300目丝网过滤后滤液中存在的较小的胶粒，对于所铺薄层板的平整度不会造成任何影响。检测CMC溶液是否均匀澄清，可以取一块干净的玻璃板在表面倾倒少许CMC溶液，倾斜玻璃板使CMC溶液流动，从侧面观察溶液表面，如果液面平整光洁则说明CMC溶液中不含较大胶粒。) （2）取适量GF254硅胶与适量的CMC溶液，比例为1:3，混合均匀，不断搅拌，静置，再搅拌，反复操作，使所有硅胶全部润湿，最后用超声波处理几分钟，充分排出溶液中的气泡即可用于铺板。 （3）将制作薄层板的玻璃片清洗干净并烘干，排布于水平桌面上，桌面上涂少许水，以固定玻璃片，再将适量已经配好的硅胶与CMC的混合液倾倒于玻璃片上，用玻璃棒尽量涂敷均匀，然后按所需硅胶层的厚度将硅胶刮平； （4）水分蒸发完毕后，即得表面平整光洁的薄层板，小心的将薄层板取下，轻轻抹平边缘，然后在110℃下烘干30min，置于干燥器中待用。 2.薄层板的涂铺活化 （1）涂铺 涂板方法可以分为涂布法、倾注法、喷洒法、其中涂布法是应用最广泛的涂板方法。TLC固定相薄层涂铺大多采用湿法匀浆，要求薄层均匀、平整、无气泡、不易造成凹坑和龟裂。 （2）活化 .薄层活化处理可以获得适宜活性，提高色谱分离效率和选择性。 活化时：将涂布好的薄层板置于室温晾干后，放在烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱内渐渐升温，维持105~110℃活化30min。 3.点样 点样一般采用易挥发的非极性或者弱极性溶剂配样。 离子型化合物的样品，常需先衍化生成在挥发性强、极性小的溶剂中易溶解的样品衍生物。最适合点样的样品浓度为（1~5）微升每微克，点样的体积视点样技术不同而异。 TLC定量分析时，样品量的适宜范围为最小检出量的几倍至几十倍。 样品原点一般在1mm左右为佳，原点过大或者样品量过大，会导致分离变坏。 点样步骤一般占TLC全部分析时间的1/3左右。 4.薄层色谱流动相及展开机制 TLC展开就是流动相沿薄层（固定相）运动，以实现样品混合组分分离的过程。 选择原则为“相似相容” 强极性试样用强极性展开剂，弱极性试样用弱极性展开剂，常用溶剂极性顺序为： 乙烷二硫化碳苯四氯化碳二氯甲烷乙醚乙酸乙酯丙酮丙醇甲醇水 展开剂的选择： 1.溶剂纯度，含有杂质影响分离； 2.溶剂吸收环境水分，会使极性等性质改变； 3.存放条件不适宜或储存时间过长，溶剂会变性； 4.混合流动相之间发生作用会使溶剂性质改变。溶剂极易挥发，流动相组成随时改变。 展开方式 液--固吸附展开 流动相依其极性可在吸附剂表面形成单分子或者双分子溶剂吸附层，展开过程中组分的保留及分离选择性主要由以下三种因素决定： （1）溶剂对样品的溶解能力； （2）溶质和流动分子对固定相表面活性吸附位点的竞争； （3）溶质分子与吸附剂表面上吸附中心间的特殊作用力。 液---液分配分开 与液--液分配柱色谱分配机理相同，组分在互不相溶的两液相中的溶解度不同，因此迁移速率存在差异，在迁移过程中得到分离。 除此之外还有化学键合相展开和离子交换展开。 5.显色和分析 被分离物质如果是有色组分，展开后薄层色谱板上即呈现有色斑点。 如果化合物本身无色，则可用碘蒸气熏的方法显色。还可以使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸等。 （1）定性方法 ①利用比移值定