分子生物学技术概论.pdfVIP

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2017-06-17 发布于北京
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分子生物学技术概论.pdf

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一、PCR仪分子生物及分子生物化学 PCR是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA片段的新技术，又称为无细胞分子克技术及仪器隆。其基本原理是以待扩增的两条DNA链作为模板，由一对人工合成的寡核苷酸引物介导，以dNTP 为底物，通过DNA多聚酶促反应，于体外快速扩增特异性DNA序列。 2013-5-29 实验技术中心三部 2 （一）基本概念 1.DNA的组成和结构多数样品经1～3小时(20～30周期)后，自然界中的DNA是以双螺旋结构形式存在的。其基本结构单位是脱氧核糖核苷酸。脱氧核苷酸由碱 DNA片段可扩增百万倍以上。然后采用核酸分基、磷酸和脱氧核糖组成。其中碱基有四种：腺嘌呤（A ）、鸟嘌呤（G ）、胞嘧啶（C ）和胸腺嘧啶子检测手段，从极微量的样品中获得足够DNA （T ）。两条互补的多聚脱氧核苷酸单链，在氢键的供分析研究之用，检出灵敏度可为10-5pg。作用下配对，形成双螺旋结构的双链。碱基的配对是固定的，即A-T ，G-C。A和T间形成两个氢键，G和C 间形成三个氢键，这种氢键连接是相当稳定的。 2013-5-29 实验技术中心三部 3 2013-5-29 实验技术中心三部 4 2.DNA的变性和复性 DNA双螺旋结构的生物学功能主要在于复制和变性和复性在一定条件下是完全可逆的。DNA双链转录。通过加热可以使DNA双螺旋的氢键断裂，双解离一半的温度称为解链温度T 。不同的DNA，T 不链解离，形成单链DNA，此即为DNA高温热变性。然 m m 同，Tm范围一般在85～97℃。当DNA含40% G-C时，Tm 而在解除变性的条件之后（如降低温度），变性的为87℃；当DNA含60% G-C时，T 为95℃。单链又可以重新结合起来，形成双链，其原有的物 m 理性质和生物活性恢复，这称为DNA复性，也叫低温退火。 2013-5-29 实验技术中心三部 5 2013-5-29 实验技术中心三部 6