Anza限制酶克隆系统简化了定向克隆.PDF

白皮书 Anza 限制酶克隆系统 Anza 限制酶克隆系统简化了定向克隆 摘要 通常使用含有与制备载体末端配对的酶切位点引物对目标DNA 序列进行 扩增 完成插入片段的制备 用于定向克隆 使用 PCR ， ， 。 尽管分子克隆近年来有诸多发展 但使用限制性内切酶 ， (REases) 连接酶将插入片段与载体序列相连接 完成克隆 在 T4 DNA ， ， ATP 和其他 修饰酶的传统克隆仍然是用于处理和扩增目的 DNA DNA 存在的条件下， 连接酶催化了带有 羟基和 磷酸基的双 T4 DNA 3´ 5´ 片段和质粒的最常用方法。 限制酶克隆系 Invitrogen™ Anza™ 链 之间磷酸二脂键的形成。 DNA 统提供了 种限制酶和 种 修饰酶 采用独特的统一缓冲 128 5 DNA ， 液以及快速 方便使用的实验方案 进一步简化了传统克隆实验 、 ， 不幸的是 由于限制酶的非特异性剪切 星号活性 不兼容的缓 ， ( )、 流程 我们在此介绍了 限制酶克隆系统的特点 以及如何 。 Anza ， 冲液或多酶切温度 以及较长的酶切反应时间 其功能存在诸多 、 ， 使用Anza组分将Emerald绿色荧光蛋白 (emGFP) 定向克隆至 限制 使用多种内切酶同时进行酶切使用的缓冲液可能对其中一 。 载体中 我们的结果 Invitrogen™ Champion™ pET302/NT-His 。 种或多种限制酶效果不佳 导致剪切效率较低 其通常的解决方 ， 。 证明了 系统的简便 快速和高效 并提供了将这些新型试剂 Anza 、 ， 法是在最佳缓冲液中进行连续酶切 但这增加了样品制备的时 ， 整合至标准克隆流程的最佳方法范例。 间 并会造成样品损失 ， 。 下文介绍了 系统的优点 并举例说明如何使用这些内切酶