生物化学研究技术-PPT-3 SDS-PAGE鉴定菠萝蛋白酶纯度.pptVIP

SDS鉴定菠萝蛋白酶的纯度;一、实验目的;二、实验原理;影响电泳的主要因素 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持物的一种电泳。 这种凝胶是由丙烯酰胺单体(简称 Acr)和交联剂 N，Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)，在催化剂的作用下聚合而成的。;聚丙烯酰胺凝胶聚合的体系有两种，即化学聚合和光聚合。 化学聚合的引发剂是过硫酸铵[(NH4)2S2O3](简称Ap)，催化剂是N，N，Nˊ，Nˊ-四甲基乙二胺(TEMED)。在催化剂TEMED的作用下，由过硫酸铵(Ap)形成氧的自由基，后者又使单体形成自由基，从而引起聚合作用。;聚丙烯酰胺凝胶的质量主要由凝胶浓度和交联度决定。 每100mL凝胶溶液中含有的单体(Acr)和交联剂(Bis)总克数称为凝胶浓度，用T％表示。 凝胶溶液中，交联剂(Bis)占单体(Acr)和交联剂(Bis)总量的百分数称为交联度，用C％表示。;不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳，带电颗粒在电场中的泳动有电荷效应、分子筛效应还具有浓缩效应。 (l) 浓缩效应 (2)电荷效应 (3)分子筛效应 ;Gel;实验试剂配制 ;(5) 浓缩胶缓冲液(0.5mol/L Tris-HCl缓冲液,pH6.8): 取6g Tris溶解后，加1mol/L HCl溶液40ml，调pH至6.8，定容至100ml 。 (6) 10%SDS(十二烷基硫酸钠)溶液: 取5g SDS加水定容至5