基因治疗肿瘤的策略及进展-生物探索.ppt

RNAi技术的快速发展必将推动生物学和医学的大步前进。RNAi在医学领域的应用也必将为各种疾病尤其是肿瘤等疾病的根治带来希望。但是,从目前RNAi的研究现状来看,在哺乳动物中,RNAi并不能完全阻断基因的表达,尤其是异常高表达的基因,这将促使人们去探索研究新的更高效siRNA表达载体体系。为了促进基于RNAi的基因药物进入临床研究和应用,大量的研究已集中到提高siRNA分子的工业化生产能力、增加siRNA分子稳定性、开发siRNA药物的靶向传递系统等方面。尽管如此,RNAi在癌症治疗中的应用已经取得非常大的成就,因此我们有理由相信RNAi必将对癌症的最终根治起到重要的作用。 第四节 核酶用于基因治疗? 1983年美国Cech和Altmann发现并鉴定了一类具有酶催化作用的核苷酸片断，称为核酶(Ribozyme)。这一发现使酶的概念从蛋白领域扩展到核酸领域。 核酶具有核苷酸内切酶的活性，它能在无蛋白质的条件下切割靶RNA分子。 核酶用于基因治疗的条件是 ①找出肿瘤发生发展中关键性的蛋白质； ②这种蛋白的氨基酸序列（和编码基因序 列）必须是已知的，以便设计核酶的切 割位点； ③所设计的核酶必须能够切割靶RNA； ④肿瘤细胞必须能摄取这种核酶， 并能在细胞内切割靶RNA。 反义治疗并不像刚开始人们所想像的那么简单，目前还有许多关键性问题有待去解决，如生物学稳定性，药物的释放系统，以及由序列特异性和非特异性所引起的作用包括毒副作用等。应用反义技术进行肿瘤基因治疗最常用的靶基因有Ha-ras、c-myc、c-fos、c-jum、c-erbB2等癌基因以及编码端粒酶基因，或端粒酶的RNA部分。 第五节 抗肿瘤血管生成的基因治疗 ? 肿瘤的生长、转移与新生血管的形成密切相关,由于肿瘤的血管生成受到血管生长因子、血管生长抑制因子以及其它的因子的共同调控,因此通过阻断促血管生长因子作用或者强化血管生长抑制因子的表达均可达到治疗的目的。 一、阻断血管生长因子的作用 主要是采用反义DNA、中和性抗体、受体酪氨酸激酶的抑制剂以及核酶等。 用腺病毒载体介导的VEGF 的拮抗物输入鼠卵巢癌抑制VEGF 的活性； 利用含有VEGF cDNA 的腺病毒载体转染乳腺癌细胞,用以拮抗VEGF 的促血管生成作用； 用抗VEGF 的核酶抑制VEGF 的表达,使卵巢癌生长及血管生成减少的报告。 针对其它的血管生成因子的治疗, 如bFGF , 缺氧诱导因子( HIF) , EGF , PDGF ,PDECGF ,IGF ,Ets-1 ,HGF 等的因子的治疗。 Zhang等用VEGF siRNA特异性地抑制VEGF的表达,成功地抑制小鼠卵巢癌上皮ID8细胞的增殖。TSP1是一种血管抑制因子,它可以抑制mmp9基因的激活,从而抑制肿瘤的生长。一般说来,肿瘤细胞能够通过抑制TSP1的表达来达到其指数增殖的目的。通常情况下,VEGF能够抵制TSP1的血管生长抑制作用。Filleur等用VEGF siRNA转染肿瘤细胞,发现VEGF siRNA抑制效应可以与分泌TSP1的肿瘤细胞协同作用,抑制肿瘤的生长,并且VEGF siRNA能阻止TSP1耐受细胞的出现,并极大地抑制了这些细胞的生长速度。 二、上调血管生长抑制因子 用重组血管抑素cDNA 输入消化道肿瘤可取得较好的治疗效果, 用编码内皮抑素的重组腺病毒载体可抑制内皮细胞迁移和VEGF 介导的血管生成, 病毒载体介导的重组编码PF4 的反义基因显示出抗鳞癌血管生长的作用。 三、抑制细胞外基质和基膜降解以及抑制内皮细胞特异性粘附分子的作用 用腺病毒载体介导的T1MP-1 基因转染肿瘤细胞,瘤细胞产生的T1MP-1 抑制了MMP-2 ,MMP-9 的活性,使内皮细胞的迁移受到抑制。Gondi 等采用双顺反子逆转录病毒载体介导的反义uPAR 和uPA 治疗胶质瘤,明显抑制了肿瘤的血管生成。 第五节 、加大肿瘤细胞与正常细胞的天然差别 —— 自杀基因治疗 自杀基因（suicide gene）治疗思路就是人为地改变肿瘤细胞的状态，将一些“自杀基因”(TK基因、CD基因和较新的细胞色素p450-2B1基因)转导入肿瘤细胞中，这些基因所表达的产物能将原先对细胞无毒或相对低毒的物质转变为细胞毒性物质，而引起到杀伤细胞的作用。 一、旁观者效应与机制 1、旁观者效应(bystander effect) 几乎所有的自杀基