中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响论文.docVIP

　　中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响论文 .freelL/L浓度的含药血清优于100 mL/L浓度的含药血清（P 0.05）。结论: 该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化,.freelresco公司）, 以pH7.2的 RPMI1640培养液制成5 g/L溶液; PHA（Sigma公司）, 以pH7.2的RPMI1640培养液制成200 mg/L溶液; 小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司, 批号: 051215); 环磷酰胺（Cy, 上海华联制药有限公司, 批号: 050306）; 中药免疫调节剂（ZY）: 黄芪、 茯苓、 白术、 防风、 甘草、 桔梗组成复方免疫调节剂, 采用自动循环煎药机提取浓缩, 按照生药量计算使终浓度为300 g/L, 购自山东泰安工商联医药商行。玉屏风散（YPF）: 选自《中国兽药典》; MC0175型CO2恒温培养箱（日本SANYO）; COIC3168型倒置相差显微镜（重庆光学仪器厂）; 2010型BLOCELLHT系列酶标仪（郑州博塞生物工程有限责任公司）; SI1640培养液调整细胞密度至5×109/L, 并用台盼蓝染色检测细胞活力 95%。 1.2.4 脾淋巴细胞增殖反应的测定 1.2.4.1 含药血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响 当血清浓度为50 mL/L时, 在96孔细胞培养板上, 每孔加入50 μL 5×109/L小鼠脾淋巴细胞, 45 μL不含血清的RPMI1640及5 μL含药血清; 当血清浓度为100 mL/L时, 在96孔细胞培养板上, 加入50 μL5×109/L小鼠脾淋巴细胞, 40 μL不含血清的RPMI1640液及10 μL含药血清。每组血清设4个重复孔, 并与同等浓度的小牛血清RPIM1640液作比较, 同时设培养液空白对照。 1.2.4.2 各试验组小鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验 在96孔细胞培养板上, 每孔加入用含100 mL/L小牛血清RPMI1640稀释的5×109/L小鼠脾淋巴细胞95 μL, A、 B、 C、 D4横排各孔均加入不含血清的RPMI1640液5 μL, E、 F、 G、 H4横排各孔均加入200 mg/L的PHA 5 μL, 每组细胞设4个重复孔, 并用含100 mL/L小牛血清的RPMI1640作空白对照。上述细胞均置37℃、 50 mL/L CO2及饱和湿度下培养44 h, 各孔加5 g/L的MTT 10 μL, 继续培养4 h后, 加入SDSDMF溶解液50 μL, 30 min后用酶标仪测A570, 结果用刺激指数（SI）表示: SI＝试验孔A均值/对照孔A均值×100%。 1.2.5 数据处理 应用统计软件SPSS10.0进行分析, 所有数据用均值±标准差（x±s）表示。 2 结果 2.1 各组小鼠脾淋巴细胞转化结果 Cy对照组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值明显低于正常对照组, 有统计学差异（P 005）; 中药免疫调节剂组和玉屏风散组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值与正常对照组差异无统计学意义（P 0.05）; 而Cy+中药免疫调节剂组和Cy+玉屏风散组小鼠脾淋巴细胞转化的A570值明显高于正常对照组（P 0.05）, 且Cy+中药免疫调节剂组对于淋巴细胞转化的促进作用优于Cy+玉屏风散组（P 0.05）。另外, 在PHA的刺激下, 各组淋巴细胞转化的A570值都有了显著提高, 且以Cy+中药免疫调节剂组及Cy+玉屏风散组最为明显（P 0.05, 表1）。 表1 各组小鼠脾淋巴细胞转化结果（略） 注: 同一列数值标有相同字母者之间无统计学意义; 标有不同字母者之间有统计学差异(P 0.05), 下表同. 表2 含药血清对小鼠脾淋巴细胞转化的影响（略） 2.2 含药血清对小鼠脾淋巴细胞转化的影响 在健康小鼠脾淋巴细胞的转化试验中, 无论加入浓度为50 mL/L还是100 mL/L的各试验组血清, Cy+中药组及Cy+玉屏风散组A570值明显高于其他组（P 0.05）; Cy对照组A570值明显低于正常对照组（P 0.05）; 单纯的中药组和玉屏风散组A570值与正常对照组差异无统计学意义（P 0.05）, 但均高于Cy组血清（P 0.05）。说明含药血清对免疫功能异常小鼠具有明显的免疫调节功能, 且在50 mL/L血清浓度时Cy+中药组血清的促进淋巴细胞转化作用优于Cy+玉屏风散组（P 0.05）。50 mL/L血清浓度与100 mL/L血清浓度相比, 有统计学差异（P 0.05, 表2）。 3 讨论 目前, 检测淋巴细胞转化最常用的方法是同位素掺入法和MTT法, 实验证明两种方法具有显著的相关性4。本试验中选用MTT法研究中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能影响。多次重复试验结果表明,