二甲双胍治疗后多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜Hoxa10的表达及意义论文.docVIP

　　二甲双胍治疗后多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜Hoxa10的表达及意义论文 李晓冬 马毓梅 张杰英 王玮 郝桂敏 蔡建辉 【关键词】 胰岛素；多囊卵巢综合征；子宫内膜 【Abstract】 AIM: To study the protein expressions of Hoxa10, insulin (INS) and insulin receptor (INSR) in the endometrium of polycystic ovarian syndrome (PCOS) rat before and after therapy etformin. METHODS: Fiftyfour female SD rats aged 85 d odel group (n=17) and metformin treatment group (n=17) randomly. The rats in the latter 2 groups ethod for PCOS modeling, folloinistration of placebo or metformin respectively. After 14 d treatment, the rats etrium testosterone and insulin etrium of PCOS group but that of INS etformin treatment group, Hoxa10 expression testosterone and insulin declined after metformin treatment (P 0.01, P=0.048). CONCLUSION: INS resistance and decreased endometrial receptivity may exist in the endometrium of PCOS rats, etformin. 【Keye; endometrium 【摘要】 目的: 探讨二甲双胍治疗前后多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠子宫内膜组织中Hoxa10及胰岛素（INS）、INS受体（INSR）蛋白表达的变化. 方法: 选取85日龄SD雌性大鼠54只，随机分为：① 对照组（20只）；② PCOS组（17只）；③ 二甲双胍治疗组（17只）. 后两组先参照Poretsky L等方法复制PCOS大鼠模型，造模成功后，PCOS组喂服安慰剂，治疗组喂服二甲双胍,14 d后断头处死各组大鼠并取材. 采用免疫组织化学ElivisionTM Plus两步法检测三组子宫内膜Hoxa10及INS，INSR蛋白的表达. 并取外周血测定INS和睾酮含量.结果: PCOS组大鼠子宫内膜Hoxa10和INSR表达下降(P 0.01,.freelarkers公司，MS1378），鼠抗mAb，效价1∶50；INSR（Neomarkers公司，MS636），鼠抗mAb，效价1∶50；ElivisionTM Plus免疫组化试剂盒（福州迈新试剂公司）；血睾酮和INS试剂盒（Beckman coulter 公司）. 1.2方法 1.2.1动物模型制备与分组将大鼠随机分为对照组（20只）， PCOS组（17只）和二甲双胍治疗组（17只）.对照组大鼠经皮下给予注射用水1 mL，2次/d. 后两组参照Poretsky等［2］的方法，经皮下注射绒毛膜促性腺激素3.0 U及INS 6 U，2次/d，22 d后检测阴道涂片和血激素水平符合PCOS模型，给动物分别喂服安慰剂和二甲双胍（按人与大鼠的公斤体质量折算系数计算剂量），1次/d，14 d后断头处死各组大鼠，取躯干血，分离血清，测定血清INS和睾酮水平. 打开腹腔，观察双侧卵巢和子宫的大体形态并以100 mL/L多聚甲醛固定, 石蜡包埋. 1.2.2光镜下形态学观察取卵巢及子宫石蜡包埋组织，4 μｍ连续切片8张，常规HE染色光镜观察. 1.2.3免疫组化检测子宫内膜Hoxa10及INS，INSR的表达取子宫切片，常规脱蜡至水、ElivisionTM Plus两步法，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，光镜观察. INSR需抗原修复. Hoxa10，INS和INSR阳性信号分别为细胞质、细胞质、细胞膜呈棕黄色颗粒. 对腺上皮细胞和间质细胞分别计分. 免疫组化半定量方法参考Mccarthy方法按染色强度（i）分为弱(淡黄)、中(黄)、强(棕黄)三等，并分别记为1，2，3分. 观察切片，计算各染色强度的细胞所占百分比（Pi）. 每张染色片的蛋白表达评分（H）=∑(i±1)×Pi. H值范围为0～4；0分为所有细胞均无染色，4分为所有细胞均为强染色，0～4之间