反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量论文.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量论文 .freelm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸(40∶60)，柱温30 ℃；流速为0.8 ml·min-1；检测波长337 nm。结果阿曼托双黄酮含量为1.197%.freell-1(r=0.999 8)。 结论该法快捷、灵敏、准确，可作为评价卷柏药材质量的参考依据。 【关键词】 卷柏 阿曼托双黄酮 高效液相色谱法 卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Sping或垫状卷柏Selaginella pulvinata(Hook. et Grev.) Maxim) 的干燥全草，具有活血通经功效，主要用于经闭痛经、癥瘕痞块、跌扑损伤、崩漏、便血、脱肛等［1］病症。根据文献报道［2～4］，卷柏中主要含有阿曼托双黄酮、新柳杉双黄酮等化合物，具有抗脂质过氧化和清除自由基的作用［5］，对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用［6］，其中阿曼托双黄酮的含量最大。采用反相高效液相法对卷柏药材指纹图谱研究的报道已见，但未见不同产地卷柏药材中阿曼托双黄酮含量测定的报道。本研究采用高效液相色谱法测定了全国10批不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量。 1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津UV-2201型紫外分光光度计；Shimadzu LC-10AT型高效液相色谱仪；SPD-10A型紫外检测器；AB204-N万分之一电子天平；AE240十万分之一电子天平；DZKariscina (Beauv.) Sping的全草。阿曼托双黄酮为本实验室自制，纯度达到99%以上。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件及系统适应性实验 色谱柱为Agilent ZORBOX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流动相为乙腈-0.2%磷酸（40∶60）。流速0.8 ml·min-1；检测波长337 nm；柱温30 ℃；进样量10 μl。 测定阿曼托双黄酮对照品溶液和卷柏药材供试品溶液，色谱图见图1。如图1所示，阿曼托双黄酮与相邻杂质峰的分离度大于2，理论塔板数按阿曼托双黄酮峰计算大于3 000。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的对照品2.50 mg，置50 ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为对照品溶液（50 μg·ml-1）。 2.3 供试品溶液的制备 精密称取卷柏药材（过3 号筛）粉末约4.00 g，置100 ml圆底烧瓶中，精密加入95％乙醇40 ml，85 ℃回流2 次，2 h/次，提取液回收溶剂，真空干燥。精密称取干燥恒重的乙醇提取物约3.00 mg，置100 ml容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。 2.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 0，2，4，6，8，10，12 μl依次进样，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程为：Y = 2 346 639 X +6 411.314（r=0.999 8）。结果表明阿曼托双黄酮在(0.1～0.6) μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。 2.5 精密度实验 精密吸取50 μg·ml-1对照品溶液，重复进样6 次，10 μl/次，测定峰面积值，计算相对标准差，结果RSD=0.92%，显示精密度良好。 2.6 重复性实验 精密称取同一样品（产地：河南）适量，照“2.3”方法分别制备供试品溶液6份，照“2.1”法进行测定，结果平均含量为1.19% ，RSD=0.13%，表明本测定方法的重复性良好。 2.7 稳定性实验 取同一样品(产地：河南) 适量，照“2.3”方法制备供试品溶液，室温下放置0，2，4，6，8，12，24，48 h进样10 μl，依法测定阿曼托双黄酮的峰面积值，计算相对标准偏差，RSD为0.35%。结果表明，供试品溶液室温下48 h内稳定。 2.8 加样回收率实验 照“2.3”方法制备供试品（产地：河南）乙醇提取物，精密称取已知含量的卷柏乙醇提取物样品9份，每份约3.00 mg，分为3 组，每组中分别加入精密称定的阿曼托双黄酮0.10，0.20，0.30 mg，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法配制回收率供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表1。结果表明，阿曼托双黄酮回收率实验良好。 表1 阿曼托双黄酮回收率实验（略） 2.9 样品含量测定 分别精密称取10批不同产地卷柏药材粉末各4.0 g，按“2.3”项方法制备供试品溶液，照“2.1”方法测定，平均含量为0.7