儿童风湿病患者肺炎支原体和EB病毒感染的研究论文.docVIP

　　儿童风湿病患者肺炎支原体和EB病毒感染的研究论文 .freelycoplasma pneumoniae，EB virus in the children atic diseases 【Abstract】 Objective To explore the relationship betycoplasma pneumoniae(MP) infection，EB virus（EBV） and rheumatic diseases.Methods Specific MP-IgM，MP-IgA and EBV－IgM，EBV-IgA antibody of 31 cases atic diseases and 30 controls atic diseases group.Either 2 cases (6.67%) atic diseases group ay be the mon pathogen in the children atic diseases and may attend the pathogenic machanism of rheumatic diseases 【Key ycoplasma pneumoniae rheumatic disease EBV-antibody children 儿童风湿病是一种全身性的多系统损害的自身免疫性疾病，目前其发病机制尚未十分清楚。感染在儿童风湿病中的作用一直受到人们重视，但有关支原体感染尤其是肺炎支原体和EB病毒(EBV)感染与儿童风湿病的关系国内少见报道。我们采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测风湿病（包括系统性红斑狼疮、幼年型特发性关节炎、皮肌炎、系统性血管炎）患儿活动期血清肺炎支原体和EBV特异性抗体IgM、IgA，并与正常对照组作比较，旨在了解肺炎支原体感染与儿童风湿病的关系，以进一步探讨儿童风湿病的发病机制。 1 对象与方法 1.1 研究对象 2000年8月～2002年9月收集小儿风湿病患儿31例，男10例，女21例，年龄2～14岁，平均年龄（8.0±3.2）岁，其中包括幼年型特发性关节炎(JIA)患儿12例（男5例，女7例）和系统性红斑狼疮(SLE)17例（男4例，女13例），系统性血管炎1例，皮肌炎［1］1例。均于疾病活动期抽取非抗凝静脉血2～3ml，离心后收集血清，置4℃保存；同时收集30例健康儿童作为正常对照组，男16例，女14例，年龄2～14岁，平均年龄（7.2±3.2）岁。 1.2 研究方法 1.2.1 MP-IgM的检测 采用Serodia MycoⅡ方法，试剂盒由日本FujiRebio inc生产。 1.2.2 操作步骤 (1)吸取200μl待测血清，56℃ 30min灭活补体。(2)将灭活后的待测血清25μl，进行倍比稀释1：10、1：20、1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280。每孔25μl加入U型反应孔内，同时设阳性血清对照。(3)于每份标本的1：10浓度孔中加入25μl非感应粒子作为阴性对照，以下浓度孔中加入25μl感应粒子。最终滴度则为1：20（阴性对照）、1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280。轻轻混匀，加盖，于室温（20℃左右）反应3h。 1.2.3 检测方法 用目测法与阳性血清及非感应粒子对照判断结果。滴度≥1：80者为阳性。 1.3 MP-IgA的检测 采用ELISA，试剂盒由陕西华煜生物医学技术公司生产。操作步骤：(1)用标本处理液稀释标本（1：100）100μl加入相应孔中。设阳性、阴性、空白对照各一孔，置37℃水浴或湿盒30min；(2)弃去标本液以洗涤液洗涤3次，每次3～5min甩干；(3)加酶标抗体，每孔2滴，空白孔中只加洗涤应用液，置37℃湿盒20min；(4)弃去酶结合物，同上洗板5次，拍干；(5)加显色底物A、B各1滴，置37℃ 5～10min；(6)终止：每孔加50μl终止液终止反应；(7)结果判断：以空白对照孔调零点，酶标仪测450nm下各孔OD值，待测孔OD值/阴性孔OD值≥2.1者为阳性。 1.4 EBV-IgM、IgA的测定 全病毒EBV-IgM、IgA测定采用ELISA，试剂盒购自德国IBL公司（批号为RE56211），操作步骤按常规进行，判断标准 CUT OFF为阳性。 2 结果 检测结果见表1、表2、表3。 表1 风湿病组与对照组血清MP-IgM、IgA，EBV-IgM、IgA阳性率分析 (%) 注：与风湿病组比较，*χ2=14.8067，P＜0.01；△χ2=6.3186，P＜0.05 表2 风湿病组患儿年龄与血清MP-IgM、MP-IgA检测结果分析 (%) 表3 SLE组和JIA组血清MP-