儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达论文.docVIP

　　儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达论文 【关键词】 生存素基因；细胞周期素B1基因；急性白血病；逆转录聚合酶链反应 Expressions of survivin and cyclin B1 gene in childhood acute leukemia 【Abstract】 AIM: To investigate the expressions and significance of survivin and cyclin B1 gene in childhood acute leukemia (AL). METHODS: The expressions of survivin and cyclin B1 gene ined by RTPCR in bone marro 42 children issive AL (ALCR) and 15 alignant disease as a control group. RESULTS: In incipient and relapsed AL groups, the expression level of survivin arkably higher than those in control group and ALCR group (P 0.01). There RNA (P=0.025). The expression of survivin gene munogenic type, initial 2a 6例，M2b 1例，M3a 3例，M3b 1例，M4b 1例). 初治35例，完全缓解(ALCR) 13例，复发7例. 初治组中ALL 26例，其中BALL 16例，TALL 5例，5例未进行免疫分型，ANLL 9例. 各组性别、年龄等条件相似. 对照组15（男9，女6）例，年龄3～14岁. 为同期住院非恶性血液病（特发性血小板减少性紫癜、缺铁性贫血等）患儿. 1.2方法Trizol试剂（Gibco公司）；逆转录酶MMLV(Promega公司)，Taq酶（Sangon公司）；PCR扩增仪（MJ公司220型）. 抽取患者骨髓液1～2 mL，ACD抗凝，采用Ficoll密度梯度离心分离出单个核细胞(mononucleic cell,.freelin，冰上冷却，加入5×Buffer 4.0 μL，RNasin核糖核酸酶抑制物1.0 μL，10 mmol/L的dNTPs 2.0 μL，37℃反应5 min，加MMuLV逆转录酶(200 MU/L) 1.0 μL，终体积20 μL，42℃反应60 min，70℃反应10 min后冰上冷却完成反应. PCR扩增 生存素上游引物：5′ACCGCATCTCTACATTCAAG3′，生存素下游引物：5′CTTTCTTCGCAGTTTCCTC3′；细胞周期素B1上游引物： 5′CCATTATTGATCGGTTCATGCAGA3′，细胞周期素B1下游引物： 5′CTAGTGCAGAATTCAGCTGTGGTA3′；βactin上游引物：5′AAGAGAGGCATCCTCACCCT3′，βactin下游引物：5′TACATGGCTGGGGTGTTGAA3′. 生存素扩增产物长度342 bp，细胞周期素B1扩增产物长度585 bp，βactin扩增产物长度218 bp. PCR反应体系为25 μL，包括逆转录产物cDNA 2 μL，10×PCR反应缓冲液2.50 μL，10 mmol dNTP 0.5 μL，25 mmol/L MgCl2 1.5 μL，生存素（或细胞周期素B1）上、下游引物,βactin上、下游引物各1.0 μL（10 μmol/L），Taq DNA聚合酶(83.35 mkat/L) 0.2 μL，其余用水补足. 生存素反应条件为：94℃ 30 s，54℃ 30 s，74℃ 40 s，30个循环. 细胞周期素B1反应条件为：94℃ 60 s，54.7℃ 60 s，74℃ 40 s，32个循环. 取扩增产物在琼脂糖凝胶上电泳，有目的基因扩增片断特异性条带者的为阳性，以无模板的PCR产物为阴性对照. 利用Gel Doc 2000系统对凝胶图像进行分析，计算样本生存素，细胞周期素B1基因PCR产物条带光密度与βactin PCR产物条带光密度比值，即为生存素，细胞周期素B1基因表达水平. 统计学处理：使用SPSS 10.0软件包处理. 生存素，细胞周期素B1基因的表达数据用中位数(P25～P75)表示，组间比较进行秩和检验，对列联表资料进行相关分析，检验水准α=0.05. 2结果 2.1生存素，细胞周期素B1 mRNA的表达初治和复发组表达均高于对照组；缓解组和对照组表达无差异；复发组生存素表达高于初治