反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量论文.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量论文 【摘要】 目的建立半枝莲药材中原儿茶酸的含量测定方法。方法样品用30％的乙醇回流提取，提取液滤过，以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定。用DiamonsilTM C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-0.05％磷酸为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长为258 nm。结果原儿茶酸的保留时间约为7 min，且与其它峰的分离度大于1.5。原儿茶酸的线性范围为0.018～0.184 μg（r=0.999 8）.freelination of Protocatechuic Acid in Scutellaria barbara Abstract:ObjectiveTo establish a method to determine the content of protocatechuic acid in Scutellaria barbara. MethodsThe sample ination of protocatechuic acid in Scutellaria barbata. The chromatographic procedure onsilTM C18 as an analytic column and a mixture of 25 volume of methanol, 75 volume of 0.05% phosphoric acid as a mobile phase at a flol·min-1. The detection . ResultsThe peak of protocatechuic acid appeared for about 7 minutes. Resolution of protocatechuic acid ore than 1.5 and its linear range inimum limit of detection ethod is sensitive and quick and can be used for the quality control of Scutellaria barbara. Key poonsilTM C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸；流速：1.0 ml·min-1；检测波长：258 nm；进样量均为20 μl；灵敏度：2.0 AUFS。在以上色谱条件下，样品中原儿茶酸与其它组分的色谱峰分离度良好。见图1。 2.2 供试品溶液的制备取本品粉末（过60目筛）约2 g，精密称定，置50 ml圆底烧瓶中，精密加入30%乙醇25 ml，称定重量，回流1 h。放冷，称定重量，用30%乙醇补充减失的量，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。 2.3 对照品贮备液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.092 mg的溶液，即得。 2.4 标准曲线的绘制及线性范围分别精密量取原儿茶酸对照品贮备液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.0 ml，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得不同浓度的对照品溶液。分别吸取20 μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积（×107）Y为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理得回归方程为：Y＝4.094 6X－0.001 4，r＝0.999 8（n＝6）。原儿茶酸在0.018～0.184 μg范围内线性关系良好。 2.5 稳定性实验分别于0，2，4，6，8 ，24 h精密吸取供试品溶液，进样测定，按上述色谱条件测定峰面积。供试品溶液于24 h内，色谱峰面积无明显变化，RSD为0.63%。结果表明在24 h内供试品溶液稳定。 2.6 精密度实验精密吸取上述供试品溶液，连续进样6次，按上述色谱条件测定峰面积。原儿茶酸峰面积的RSD为0.41%，表明该法的精密度良好。 2.7 重复性实验取同一批半枝莲药材粉末（过60目筛）约2 g，共6份，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量，其RSD为0.86%，表明该法重现性良好。 2.8 最低检测限实验取上述对照品贮备液，逐步稀释，进样，直至信噪比S/N≥3，此时进样量即为最低检测限。原儿茶酸的最低检测限为3 ng。 2.9 回收率实验取已知原儿茶酸含量为59.61 μg·g-1的半枝莲药材粉末（过60目筛）约1 g，共6份，精密称定。分别精密量取上述原儿茶酸对照品储备液0.7 ml，加入上述6份药材中，按“2.2”项下方法操作制备供试品溶液。测定其平均回收率为99.7%，RSD为0.27%。可见本方法的准确度高，精密度好，方