反相高效液相色谱法测定薄芝菌丝体中 3种核苷类成分的含量论文.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定薄芝菌丝体中 3种核苷类成分的含量论文 【摘要】 目的建立高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法同时测定薄芝菌丝体中3种核苷类成分（尿嘧啶、尿苷、腺苷）的含量。方法采用RP-HPLC法测定，Alltima C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)为色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱（0～15 min，乙腈-水比例为5∶995，15～30 min，比例为15∶985）.freell·min-1，检测波长262 nm。结果3个核苷的线性范围分别为，尿嘧啶：0.140 2 ～0.700 8 μg, (r=0.999 8,n=5)；尿苷：0.103 2～0.515 6μg(r=0.999 7,n=5)；腺苷：0.124 5～0.622 4 μg(r=0.999 4,n=5)。平均加样回收率分别为：尿嘧啶99.44%，尿苷100.08%，腺苷99.96%。结论该方法灵敏度高、操作简便、重复性好、效率高,为全面评价薄芝菌丝体质量提供一个可靠方法。 【关键词】 反相高效液相色谱法； 薄芝菌丝体； 梯度洗脱； 核苷类成分 Abstract：ObjectiveTo determine the contents of nucleosides in Bo Zhi Mycelium(uracil, uridine, adenosine) by HPLC a- C18 analytical column (5μm,250 mm×4.6 mm). The mobile plase consisted of acetonitrile-in,CH3-in, CH3-l·min-1.The UV detection .ResultsThe linear ranges of uracil, uridine and adenosine ethod is simple,reliable,efficient,and provides a reference standard for the quality control of Bo Zhi Mycelium. Key ; Nucleosides; Gradient elution 薄芝菌丝体为多孔菌科灵芝属薄盖灵芝Ganoderma capense(Lloyd.)Tend.菌经深层培养所得的菌丝体。市场上有用薄盖灵芝菌丝体为原料制成的薄芝片和注射液，临床上主要用于硬皮病、皮肌炎、多发性肌炎、红斑狼疮、斑秃、银屑病、进行性肌营养不良、妇女更年期综合征、神经衰弱等病症治疗。对所含有效成分的含量测定研究，文献报道虽有尿苷作为原料菌丝体含量测定报道［1］，但未见多种成分的测定报道，鉴于中药多组份多靶点的作用特点，本实验采用HPLC法对其原料菌丝体所含功效成分腺苷、尿嘧啶、尿苷3种成分在同一条件下进行了含量测定研究。 1 仪器与试药 1.1 仪器高效液相色谱仪（美国S﹒S﹒I Series Ⅲ 泵，检测器 美国S﹒S﹒I Model 500）；Alltima C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm)；千谱数据处理系统。 1.2 试药腺苷对照品（美国 Sigma公司，含量99%，批号 1093813）；尿嘧啶对照品（美国 Sigma公司，含量99%，批号1083813）；尿苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号887-200001）；溶剂均为分析纯和色谱纯，超纯水。 1.3 药材薄芝菌丝体由南京中医药大学生药鉴定教研室刘训红教授鉴定。 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取80℃干燥至恒重的对照品：尿嘧啶4.38 mg，尿苷3.23 mg，腺苷3.89 mg，称定，分别置25 ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度。吸取各对照品储备液1，2，3，4，5 ml于25 ml量瓶中，混合，加水稀释至刻度，摇匀，依次作为1，2，3，4和5号混合对照品溶液。 2.1.2 供试品溶液的制备 取本品细粉1 g，精密称定，精密加入水50 ml，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加2 ml水溶解，拌入硅胶0.5 g，置硅胶小柱（100～200目，10 g内径1.5～2.0 cm，湿法装柱）上，用丙酮-乙醇（3∶1）100 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水定容至25 ml，摇匀，过滤，取续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。 2.1.3 专属性实验 用流动相及空白溶剂进样,结果表明系统无污染，阴性对照对检测结果无干扰。用供试品溶液及混合对照品溶液进样，单一成分的色谱峰保留时间与供试品对应成分的色谱峰保留时间相比较彼此吻合，表明方法专属性良好。见图1。理论