发光金纳米粒子测定曲通X100及其临界胶束浓度论文.docVIP

　　发光金纳米粒子测定曲通X100及其临界胶束浓度论文 刘玫瑰 曹春 曹明 朱昌青 【摘要】 参照文献方法合成了BSA保护的水溶性发光金纳米粒子, 并考察了此探针在非离子表面活性剂曲通X100中的发光行为。根据观察到的发光增强效应, 建立了一种简单的测定曲通X100的方法。考察了发光金纳米粒子的浓度、体系酸度、反应时间及共存物质对测定的影响。在最佳条件下, 发光强度与曲通X100的浓度分别在0～150 μmol/L和150～600 μmol/L范围内分段成正比关系。两条工作曲线的交点所对应的浓度与曲通X100的临界胶束浓度十分吻合, 为胶束形成过程提供了直接的指示。作为一种生物相容性探针, 发光金纳米粒子被用于生物学样品中曲通X100的分析测定, 结果令人满意。 【关键词】 曲通X100, 临界胶束浓度, 发光金纳米粒子 1 引 言 曲通X100(TX100)是一种重要的非离子表面活性剂, 广泛应用于生物化学领域1,2。如在免疫组织化学和免疫细胞化学中, TX100可通过溶解细胞膜上的脂质成分, 使抗体进入细胞3。检测TX100的浓度,.freelinescent gold nanoparticles, GNPs)具有独特的发光性能和良好的生物相容性等优点。近年来, 利用各种方法9～11合成出的GNPs已用于溶液中Hg2+ 11和Ni2+ 12的测定, 以及细胞成像10分析。 本实验参照文献13的方法合成了牛血清白蛋白(BSA)修饰的GNPs。实验发现, 水中的溶解氧对GNPs的发光有明显的猝灭效应，而在体系中加入TX100, 则能有效降低溶氧对GNPs猝灭。在最佳条件下, 发光强度与TX100的浓度分别在0～150 μmol/L和150～600 μmol/L范围内分段成正比关系, 可据此建立灵敏的测定TX100的发光方法。此外, 两条工作曲线的交点所对应的浓度与TX100的CMC值十分吻合, 为测定其CMC值、判断胶束的形成提供了简单的方法。利用此生物相容性探针, 测定了实际生物学样品中TX100的含量, 结果令人满意。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 F4500荧光分光光度计(日本Hitachi公司); U3010紫外可见分光光度计(日本Hitachi公司); JEOL2010高分辨电镜(HRTEM, 日本电子株式会社); 851型磁力搅拌器(江苏金坛正基仪器有限公司); TGL16C型高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA); 曲通X100(Triton X100, TX100， 上海国药集团化学试剂有限公司; 所用试剂均为分析纯; 水为二次蒸馏水。 2.2 实验方法 2.2.1 GNPs的制备13 0.125 mL 1% HAuCl4·4H2O(m/V)稀释到20 mL,加入134 mg BSA , 剧烈搅拌2 h, 加入30.6 mg NaBH4继续反应24 h, 高速离心除去较大粒径的粒子后备用。HAuCl4·4H2O与BSA的摩尔比是3∶1。以L色氨酸的量子效率(QY)为基准(QY=0.14), GNPs的量子效率QY=0.052 , 与文献13一致。 2.2.2 样品处理 在一系列10 mL具塞试管中分别加入0.48 mL GNPs溶液、1 mL 0.1 mol/L Na2CO3NaHCO3(pH 9.9)缓冲溶液, 然后加入不同量的TX100标准溶液或样品溶液, 稀释至6.0 mL并充分摇匀, 在室温下放置10 min后进行荧光测定。 荧光测量在室温(15 ℃)下进行, 采用光通路10 mm的石英比色皿, 激发波长为320 nm, 激发和发射狭缝宽度为10 nm; 光电倍增管的电压为-700 V。 实际样品由安徽师范大学生命科学学院提供。取校园植物(卷柏、雪松), 剪碎, 放研钵中加液氮磨碎。称取该新鲜植物细胞样品0.1 g, 用0.001 mol/L TX100溶液在65 ℃水浴中振荡处理50 min, 离心后取不同量的上层清液按分析步骤进行测定。 3 结果与讨论 3.1 发光金纳米粒子的表征及其与TX100的相互作用 图1是GNPs的透射电镜图。 由图1可以看出, 所制备的GNPs的尺寸约为5.3 nm, 尺寸较均一。如图2所示, 随着TX100浓度增加, GNPs的荧光发射逐渐增强, 且发射峰位自412.4 nm， 红移至423.3 nm。此现象的原因可能同于胶束对有机染料的增敏作用。在胶束形成之前, 以单体形式存在的TX100与GNPs作用4, 不断改善了GNPs所处的微观环境, 稳定其发光, 使荧光增强。当TX100胶束形成后, 在GNPs表面