用于组织工程的种子细胞2011.ppt

用于组织工程的种子细胞 选择种子细胞的要求： 采用非侵袭手段或微创手段即可获得的组织； 分裂增殖能力强； 功能旺盛； 无或仅有极微弱的免疫排斥反应； 能连续传代，并且传代培养后不发生形态、功能及遗传物质的改变。 获得的种子细胞可以接种到受伤降解性支架，再移植到受伤组织。 第一节同种自体、同种异体和异种细胞 自体的种子细胞 : 优点： 无免疫排斥，组织相容性好， 无伦理学障碍，临床应用好，这是较为理想的细胞来源。 缺点： 获得非常有限，尤其是当组织受伤较严重时，或机体条件不佳时，不能保证获得状态良好的细胞； 老年人自体细胞的增殖能力较差，形成新组织的能力相对较低； 取材时会造成机体的进一步破坏，因而自体细胞在组织工程中不能得到广泛的应用。 同种异体的种子细胞： 优点 可由胚胎、新生儿和成年人体的组织中获得，来源广泛，获得容易，可预先库存备用。如果将同种异体细胞经过基因改造，建立无瘤倾向的标准细胞系，则能进行产业化生产。 胚胎来源的多种生物制品及细胞因其免疫原性很低，细胞的生命期长，分裂能力强。具有很好的治疗效果优于成体细胞。 缺点 需进一步研究其抗原性及进一步采取降低抗原性的措施，如应用免疫隔离技术等。 第一个组织工程产品——人工皮肤 1997年3月经美国FDA批准上市 由新生儿的包皮成纤维细胞培植而成，种植在由聚乳酸和聚乙醇酸构成的支架上，呈层状结构，与正常人的皮肤极为相似，能分泌人体皮肤胶原、生长因子和结构性蛋白。 移植数星期后，该支架材料逐渐降解，形成与正常皮肤结构相类似的组织，并与病人自身的皮肤很好地融合，不存在排异反应等，就连病人自身的血管和色素也会逐渐转移到“适移植”活性皮肤中去，愈后不留瘢痕。这种产品可以冻存并运输。 还有另外一种FDA认证的皮肤产品，它同时含有表皮和真皮。 该产品的制作是将成纤维细胞混入胶原凝胶中培养后，再在凝胶状混合物上滴加表皮细胞。 将该产品移植入患者后，在愈合过程中，部分由患者本身组织所替代，存在于真皮中的成纤维细胞可以分泌胞外基质蛋白，并可以对环境的改变作出反应。体外移植后，可以坚持长达6个月。 异种细胞作为种子细胞的可能性。 由于异种移植存在超急排斥反应，即使克服了超急排斥反应，还需克服急性、慢性排斥反应。为了克服超急排斥反应，已成功地建立了转基因模型。一旦基本克服异种细胞的免疫反应及人畜共患疾病，异种细胞有可能作为组织工程的种子细胞。 第二节干细胞的研究及其在组织工程中的应用 一、干细胞生物工程 干细胞生物工程是指在体外对于细胞进行操作，包括体外增殖、定向诱导、横向分化、基因修饰和组织成形等。 利用干细胞构建各种细胞、组织、器官作为移植器官的来源，已经成为干细胞医学生物工程应用的主要方向之一。 由于干细胞工程将改变传统的最为短缺的器官来源问题，科学家预言干细胞极有可能成为治疗目前难以治愈的疾病的新方法。 干细胞生物工程是一个宏大的技术体系和项目群，在医药健康领域内是一种辐射力极大的替代性工程技术。 干细胞的基础和应用研究 干细胞的生物学特性和分类 干细胞与细胞替代治疗 干细胞与基因治疗 干细胞与组织工程 干细胞的定义 简单的讲，干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞，能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞。 从功能上讲，干细胞是一类具有多向分化潜能、自我更新能力的细胞， 是处于细胞系起源顶端的最原始的细胞，在体内能够分化产生某种特定组织类型的细胞。 干细胞的生物学特性 终身保持未分化或低分化特征，缺乏分化标记。 在机体的数目、位置相对恒定。 具有自我更新能力。 能够无限地分裂、增殖。可连续分裂几代，也可长期处于静止状态。 具有多向分化潜能，也具有分化发育的可塑性，受所处微环境的影响。 分裂的慢周期性，大多数处于G0。 通过两种方式生长：对称分裂和不对称分裂。 干细胞的分类 胚胎干细胞主要来源 胚囊的内细胞团及受精卵发育至桑椹胚之前的早期胚胎细胞 从胎儿生殖嵴分离得到的原生殖细胞(EG)也具有ES细胞的特性，可以分化为各种类型的成熟细胞 体细胞核转移至去核卵母细胞后也可以培育出类似胚胎干细胞的全能细胞 1、来源于胚胎内细胞群 PGC细胞的分离和培养 小鼠胎儿的获取 小鼠胎儿的处理 组织块消化 细胞培养 PGC细胞的获取 在成纤维细胞上 的生长 PGC细胞的生长行为 体外分化实验 讨论 选择分化抑制物，制备胚胎干细胞饲养层 胚胎干细胞的分离 胚胎干细胞的培养、克隆和传代以及培养条件的确定 胚胎干细胞鉴定方法的建立 小鼠体细胞核移植技术的初步研究 引言 体细胞核转移是治疗性克隆的关键技术,建立和掌握成熟的体细胞核移植技术，对在临床上成功地进行治疗性克隆的应用非常重要。 本研究以小鼠卵丘细胞为核供细胞，卵母细胞为核受体组成重构胚