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淋球菌检查 华中科技大学附属协和医院皮肤科 林能兴 【适应证】 淋病 【禁忌证】 无 【并发症】 无 【用物准备】 无菌生理盐水、细小棉拭子、扩阴器、载玻片 ,培养皿，氧化酶试剂等 【操作流程】 1. 分泌物的涂片检查（男性） 1）用灭菌生理盐水洗净尿道口。 2）戴无菌手套，用手指由阴茎根部向尿道口方向挤出脓液，用棉签拭子蘸取脓液，涂于载玻片上，自然干燥后加热固定。 3）革兰氏染色 4）显微镜下观察，在多形核白细胞内发现革兰氏阴性双球菌可明确诊断。 附：革兰氏染色法 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： （口诀1 1 半 半 ） 1）载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）自来水冲洗，去掉浮色。 　　 4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 6）用蕃红染液复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。 2.淋球菌培养 1）取材 （1）男性患者从尿道取材，用细小棉拭子伸入尿道2~4cm，轻轻转动并停留10~20s后取出。 （2）女性患者在妇检床上取材，先用扩阴器暴露宫颈口，用无菌棉拭子拭去宫颈口表面的分泌物，另取一拭子插入宫颈口内1~2 cm，转动并停留10~20s后取出。 （3）对无性交史女性可采集阴道处分泌物。 （4）直肠取材时，应将棉拭子插入肛门2~3cm。 （5）检查淋球菌咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材 2）标本取出后立即接种于培养基中，目前常用加入多粘菌素的血液琼脂或巧克力培养基 3）初次分离培养应使用5%~10%CO2浊缸，培养温度36℃为宜，24~48小时后观察 4）淋球菌在多粘菌素的血液琼脂上经24~48h培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色的菌落，边缘呈花瓣状，直径0.5~1.0cm，用接种环触之有粘性，如继续培养，菌落体积增大，表面粗糙，边缘皱缩。 3.淋球菌的鉴定 1)配制氧化酶试剂：0.5%~1%盐酸二甲基对苯二铵水溶液； 2）将溶液滴加在可疑菌落上，观察颜色变化，也可将试剂滴在一小张滤纸片上，然后挑取可疑菌落与之接触，观察颜色变化。 3）菌落在接触氧化酶试剂15~20S出现红色，保持30s以上，然后逐渐变成紫色，最后是黑色，为氧化酶试验阳性，证实为淋球菌 【注意事项】 1）涂片时不要用力涂擦，厚薄要合适。 2）培养取材时拭子伸入尿道或宫颈的深度要足够，并停留一段时间。 3）取材后应立即接种。 4）对症状不典型的男性患者取材，最好是晨起排尿前或排尿4h后。 5)女性宫颈分泌物、咽和直肠标本在涂片中由于杂菌较多，故推荐用培养法 6）分离培养应采用加抗生素的选择性培养基 7）氧化酶试剂应为新鲜配制（现用现配），在棕色瓶中避光保存 8）氧化酶遇铁也会变成红色，接种环应为非铁丝所制 考试模拟题：女性淋病取材培养 * * *