第五章有机溶剂中的酶催化作用辨析.pptVIP

* 正由于以上原因，正确选择有机溶剂显得十分重要。所以必须考虑以下几种因素： （1）溶剂与反应的相容性。例如，酶催化糖修饰反应，必须在亲水性的有机溶剂（加二甲基甲酰胺等）中进行。若使用疏水性有机溶剂，底物不溶解，酶促反应不能发生。 （2）溶剂对主要的反应应该是惰性的。 （3）溶剂的密度、粘度、表面张力、毒性、废物的处理和成本等。 但是普遍认为最佳溶剂因底物而异。 即一种溶剂在辛醇／水两相间分配系数的常用对数值(lgP)。 P大，酶活性大，所需要的水量少。 * 后来又有用临界流体反应体系，在产物中不留下任何溶剂。 即在临界温度、临界压力下反应。 如用CO2作介质，进行多酚氧化酶的催化反应，反应后CO2全部从反应体系中自然去除。 还有用超临界CO2作介质，进行脂肪酶的催化反应，可以把压力提高到适当的数值，使转酯反应大大加快。 * * 图中表示了与气相、液相、固相区相对应的超临界流体区 图中直线表示以CO2的密度为第三参数的Tp关系。CO2密度随压力与温度的增减而产生较大的变化。 如温度为37℃时，压力由7.2MPa（p＝0.21g/cm3）上升到10.3Mpa（p=0.59g/ cm3），密度增加了2.8倍。 当压力为10.3MPa时，温度由92℃下降到37 ℃，也可发生相应的密度变化。 在临界区的附近，压力和温度的微小变化，引起流体的密度大幅度的变化。 * 六、 pH的选择问题： 因为在有机介质中的最适pH与水溶液中的最适pH的酶反应是一样的，所以在进行酶的冻干时，可以在最适pH的缓冲液中冻干出来，再进行有机系统的反应。 这样，可以使酶在有机溶剂中反应的微环境具有溶液酶的最适pH环境。? * 第三节 有机介质对酶反应的影响 总起来讲基本上遵循米氏方程的动力学。 但也有一些影响。 * 一、 酶的稳定性问题 1）一般被认为酶更加稳定，因为对热的稳定性提高。 如猪胰脂肪酶在醇和酯中进行反应，100℃温度下反应,半衰期12小时以上, 活性比25℃时高好几倍。 胰凝乳蛋白酶在60℃水中，几分钟就会有失活。 而在辛烷中，半衰期有几个小时。 2）存储酶的存储稳定性提高 胰凝乳蛋白酶20℃的水中，半衰期只有几天。 而在辛烷中，半衰期有6个月，活性全部不损失。 * 二、 活性 a)单相共溶剂系统中 对酶的影响作用主要是如下： 1) 有机溶剂直接作用于酶，破坏维持酶活性构象的氢键、疏水键、水化层，酶变性失活。 一般有随着有机溶剂浓度上升,活性下降的一般规律。 2)但有些酶，有机溶剂的浓度上升，酶活性反而上升，到一定浓度， 酶活性达最高，如再提高浓度，酶活性反而下降。 如胰蛋白酶在1,4-丁二醇中最适浓度80%猪心线粒体ATPase，在乙醇中最适浓度10% EcoRI内切酶在甘油中最适浓度为20% * b)低水有机系统： 有些酶反应会发生变化，如沉淀在玻璃球上的胆固醇氧化酶在有机溶剂中测定胆固醇，速度只是水中的10—25%。又如酵母醇脱氢酶在1%的水和醋酸丁酯中反应，酶活性是水中的1-60%左右。 总之，酶活性随着水活度的大小而不同，而水活度一定，酶活性会随着载体不同而不同，这是一般的规律。 * c)反向微团系统： 在这个系统中有些酶活性会上升。 漆酶（Laccase）与水中的漆酶比较，它水解邻 苯二酚氧化的最大速率，催化活性大100倍以上。 分析原因： 主要是依赖于微团的水化程度，因为水与表面活性剂存在的摩尔比大小。反向微团脂肪酶的最适水化程度R=9.8。 过氧化物酶、酸性磷酸酶在反向微团中的活性 高成万倍(与水中比)。 把活性高于水中的叫超活性 * 分析这种现象的理论很多，主要的解释是： 1）微团的水化程度W=水/表面活性剂其水化程度的最佳值与酶活性 最大值成正比例关系。 2）W值最佳时，微团内径=酶分子直径，认为酶的超活性是由酶分子 外面的表面活性剂这一个外壳的较大的刚性所引起。 * 三、 专一性： 一般产生的专一性减弱，被认为由二种原因引起： 1)有疏水骚动力作用的结果。 2)酶活性中心刚性的增强引起。 例如：脂肪酶是水解脂肪------脂肪酸，而在有机介质中有合成肽键的功能。 * 四、 反应方向的改变 水解酶类在水介质中，水的浓度为55.5M/L，反应是向右，即水解的方向。而在有机介质中，平衡向左，向合成的方向进行。而且已经应用在工业生产上，如As