无毒苗木培养.ppt

由于大部分病毒都不是通过种子传 播的，因此若是使用未受侵染或侵染程度较轻的个体的种子进行繁殖就有可能得到无病毒植株。 病毒在植物体内的分布是不均匀的，在受侵染的植物中，顶端分生组织一般说或者是无毒的，或者只携带有浓度很低的病毒。 13.2 术语释义 “无病毒”植物一词只有当某些病毒在特定的检验中为负结果时，才能说该植物不带有那些病毒。 13.3 通过热处理消除病毒 热空气处理：把旺盛生长的植物移入到一个热疗室中，在35—40。C下处理一段时间即可。处理的时间的长短，可由几分钟到数周不等。因植物而异。 热处理时，最初几天空气温度应逐步增高，直到达到要求的温度为止。若钝化病毒所需要的连续高温处理会伤害寄主组织，则应当试验高低温交替的效果。 和单独采用热疗法相比，茎尖培养具更广泛的适用性。茎尖培养现在已成为消除病毒的一个很常用的手段。 13.4 通过茎尖培养消除病毒 13.4.1 外植体的名称 1、在应用组织培养方法以获得无病原菌植物时，所用的外植体可以是茎尖，也可以是茎的顶端分生组织。 2、茎的顶端分生组织：指茎的最幼龄叶原基上方的一部分，最大直径约为100um，最大长度约为250um。 3、茎尖：是指由顶端分生组织及其下方的1—3个幼叶原基一起构成的。 13.4.2 方法 1、防止茎尖变干。 2、最好先把供试植株种在无菌的盆土中， 并放在温室中进行栽培。浇水时，水 要直接浇在土壤上，而不要浇在叶片 上。另外，最好还要给植株定期喷施 内吸杀菌剂，如苯菌灵（0.1%）和 抗生素链霉素（0.1%）的混合液。 3、在切取外植体之前一般仍需对茎芽进 行表面消毒。叶片包被严紧的芽，只 需在75%酒精浸醺一下，而叶片包 被松散的芽，则要用0.1%的次氯酸 钠溶液表面消毒10min。 4、在剖取茎尖使要防止染菌。 5、有茎尖长出的新茎，若不能生根，则须把脱病毒的茎嫁接到健康的砧木上。 13.4.3 在茎尖培养中影响 脱毒效果的因素 13.4.3.1 培养基 通过正确选择培养基，可以显著提高获得完整植株的成功率，所应考虑的培养基的主要性质是它的营养成分、生长调节物质和物理状态。 1、培养基中必须有一定量的K+和NH 4+。 2、MS培养基使用于茎尖培养。 3、一般来说，含有少量（0.1— 0.5mg/L) 或者二者兼有常常是有利的。生长 素可能是由第而对幼叶原基形成的。 在洋紫苏、胡萝卜、烟草、旱金莲 以及一种百合植物中，要能成功的 培养不带任何叶原基的分生组织外 植体，外源激素的存在是必不可少 的。在麝香石竹离体顶端分生组织培养中，既需要生长素，也需细胞分裂素。 在各种不同的生长素中，应当避免使用 2，4—D，因为它通常能诱导外植体形 成愈伤组织。广泛使用的生长素是NAA IAA，其中NAA由于比较稳定，效果更好。 4、GA3培养基有作者认为能抑制愈伤组织的形成，有助于更好地生长和分化。然而其他一些作者却发现， GA3并没有什么显著作用，在高浓度时甚至有抑制效应。 13.4.3.2 外植体大小 1、外植体越大，产生再生植株的机会也越多。小的外植体可能不利于茎的生根。但外植体大小与脱毒效率呈负相关。外植体大小应小到足以能根除病毒，大到足以能发育成一个完整的植株。 2、叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力。不带叶原基的顶端分生组织可能有利于形成完整的植株，但不利于脱毒。故用较大的带叶原基的茎尖做外植体比只用分生组织效果较好。 13.4.3.3 培养条件 1、在茎尖培养中，一般照光培养的 效果通常比暗培养好。但天竺葵 茎尖培养使须一段时间的黑暗。 2、对温度的要求，培养物通常都是 放在标准的培养室温度下。 （25 。C +2 。C） 13.4.3.4 外植体的生理状态 1、茎尖最好要由活跃生长的芽上切取。 为了增加脱毒植株的总数还是要采用腋芽，这是因为腋芽在每个枝条上有好几个，而顶芽只有一个。 2、取芽时间必须在生长旺盛的季节，不要在休眠期进行，若要在休眠期进行，则必须采用某中适当的处理。 13.4.3.5 热疗法 把茎尖培养和与热疗法结合起来，有利于或得脱病毒植株。热处理可在切取茎尖之前在母株上进行，也可以在茎尖培养期间进行。但在切取茎尖之前的母株上进行可切取较大的外植体进行培养，效果更好。 要慎重处理热处理的时间。在菊花中， 热处理时间由10d增加到30d，可使 无病毒植株百分数由9%增加到90%