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β-葡萄糖苷酶研究进展 问题的提出及意义 　 随着能源危机、食物短缺、环境污染等问题正日益严重地困扰着整个世界寻找开发新能源、节省粮食、减少环境污染显得越来越重要。纤维素类物质是自然界中存在的最廉价、最丰富的一类可再生资源。全世界每年的植物体生成量高达100-500亿吨干物质其中一半以上为纤维素和半纤维素[1]。纤维素在一定条件下可以被水解成单糖单糖可再通过微生物发酵生产各种有用的产品如饲料、燃料、化工原料、食品药品等并且可取代目前的淀粉原料发酵生产的各种产品以及由化工燃料合成生产的部分有机产品[23]。开发高效转化木质纤维素类可再生资源的微生物技术利用工农业废弃物等发酵生产人类急需的燃料、饲料及化工产品即化工原料的绿色化具有极其重要的意义和光明的发展前景。 纤维素酶是一类能够降解纤维素生成葡萄糖的酶的总称，它是一类复杂的复合物，称之为纤维素酶系,根据其中各酶功能的差异，可将其分为三大类：(1)内切β- 1，4- 葡聚糖酶(endo- β- 1, 4- glucanase，EC3.2.1.4也称Cx 酶)，作用于纤维素分子内部的非结晶区或羧甲基纤维素，随机水解β - 1 ，4 - 糖苷键，将长链纤维分子截断产生大量小分子纤维素；(2)外切β- 1，4- 葡聚糖酶(exo- β- 1, 4- glucanase，EC3.2.1.91，也称C1 酶)，作用于纤维素线状分子末端，水解β - 1 , 4 - 糖苷键，每次从纤维素链的非还原端切下一个纤维二糖分子，可以水解微晶纤维素； (3)(cellobiohydrolase,EC2.1.21，简称CBH)，水解纤维二糖和短链的纤维寡糖生成葡萄糖[4]。3种酶协同作用，完成对纤维素的降解。 1837年，Liebig 和 Wohler 首次在苦杏仁中发现β-葡萄糖苷酶[5]。后来研究发现，β-葡萄糖苷酶存在于植物[6]、昆虫[7]、酵母、曲霉及细菌体内。它参与生物体的糖代谢，对维持生物体正常生理功能起着重要作用。β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系的重要成员，在纤维素水解时，纤维二糖的积累会抑制内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶的活性，而纤维素酶组分中该酶含量最少、活力普遍较低，因此成为纤维素酶解的瓶颈[8]。增加β-葡萄糖苷酶活性，会有效提高纤维素酶解效率。目前，国内外多家研究机构正致力于β-葡萄糖苷酶的分子生物学研究，以期望更好改善纤维素酶的催化效率，利用纤维素资源。 国内外研究现状 目前β-葡萄糖苷酶的研究主要集中在高效产生菌分离、酶作用机理、酶生理生化特性及β-葡萄糖苷酶基因克隆上。 1.2.1 β-葡萄糖苷酶的分类与底物特异性 根据氨基酸序列分类，将β-葡萄糖苷酶划分在糖苷水解酶家族1和3中。家族1中的β-葡萄糖苷酶来自于细菌、植物和哺乳动物；家族3中的酶来自于真菌、细菌和植物。家族l中的酶除有葡萄糖苷酶活性外，还有很强的半乳糖苷酶活性[9]。 几乎所有的β-葡萄糖苷酶对底物的糖基部分结构的专一性较差。能裂解C—0糖苷键、C—S键、C—N键、C—F键等；有些对糖基部分的C和C构形也不专一， 能同时水解β-葡萄糖苷酶键和β-半乳糖苷键，有些甚至C位的专一性也不高，能水解木糖[10]。但在所有底物中，β-葡萄糖苷酶对纤维二糖的活性最强。在β-葡萄糖苷酶C端的高度保守序列可能与结合糖苷底物有关，在这区段的微小差异决定了β-葡萄糖苷酶的不同底物特异性[11]。 1.2.2 β- 葡萄糖苷酶的理化性质[12,13,14] 一般来说，不同来源的β-葡萄糖苷酶的相对分子量由于其结构和组成不同而差异很大，最适pH相差不多，最适温度因其来源不同而相差很大，表一[15]列举了一些不同来源的β-葡萄糖苷酶的理化性质。表一 不同来源的β-葡萄糖苷酶的理化性质 β-葡萄糖苷酶的相对分子量一般在40—250kDa之间。已报导的β-葡萄糖苷酶的pI 大多数都在酸性范围，并且变化不大，一般在3.5～5.5 之间，但最适pH 可以超过7.0，而且酸碱耐受性强。β- 葡萄糖苷酶的最适温度在4 0～1 1 0 ℃之间都有分布；一般来说，来自植物的β-葡萄糖苷酶最适温度在40℃左右，而来自古细菌的β-葡萄糖苷酶其热稳定性和最适温度要高于普通微生物来源的β-葡萄糖苷酶[16]。对于工业应用来说，酶的热稳定性越高越有利。因此，从嗜热细菌中分离β-葡萄糖苷酶引起了人们的兴趣。1.2.3 β- 葡萄糖苷酶的结构及催化机制 随着越来越多的β-葡萄糖苷酶基因已被克隆和序列分析，为其基因结构与功能方面的研究提供了重要依据。 同其他纤维素酶一样，β-葡萄糖苷酶也具有纤维素酶的一般结构，即含有催化结构域（CD）、结合结构域(CBD)、连接肽(Linker peptide)。催化结构域含有进行催化作用的活性中心，体现了催化活性及对特定水溶性底物