原发性肝癌研究进展—培训课件.pptVIP

基因治疗 肝癌基因治疗载体系统的选择 肝癌基因治疗中治疗基因的选择 存在的问题及展望 肝癌基因治疗载体系统的选择 病毒载体（腺病毒、逆转录病毒、腺病毒相关病毒） 腺病毒载体系统在肝癌治疗试验当中应用较多。体外实验已证实人肝癌细胞系HepG2、Hep3B、Hnh7、HLE、HLF、SK2HEP21 和大鼠肝癌细胞系McA2RH7777 等均对腺病毒十分易感。 逆转录病毒载体进行肝脏疾病的基因治疗,也有其有利之处:因逆转录病毒只感染处于复制、分裂期的细胞,而处于非复制期的细胞则不受感染,而肿瘤细胞多处于分裂期,周围的正常肝细胞多处于静止期,故逆转录病毒载体具有一定的靶细胞特异性。 目前所使用的腺病毒、逆转录病毒及腺相关病毒载体系统尚不同时具备低毒性、高效率、大容量、可控基因的转录及表达等特点,还需进一步加强对病毒载体的研究。 杆状病毒载体：不能在哺乳细胞内复制，具有较好的安全性，但其在细胞内的作用时间短，在其载体内插入EBNA1和OriP元件可大大延长其作用时间。 非病毒载体 非病毒载体,如脂质体DNA 复合物等,也能将目的基因导入肝癌细胞内,且无明显毒副作用,具有简便、安全、可携带较大DNA 分子等优点,又可反复多次注射,缺点是转染效率太低,因此应用受到限制。 肝癌特异性基因表达系统 使用靶细胞特异性表达载体,可使治疗基因选择性表达在肝癌细胞内,可减少正常肝脏的毒性损害。目前报道较多的是选用肝癌特异性调控元件来驱动目的基因在肝癌细胞中的表达,主要包括甲胎蛋白(AFP)启动子、白蛋白启动子、胰岛素样生长因子Ⅱ( IGF Ⅱ) 基因启动子等,因白蛋白和IGF Ⅱ并不只是在肝癌细胞中表达,特异性不强,故较少采用。 使用AFP 启动子,将目的基因置于AFP 转录调控序列下,达到使目的基因在肝癌细胞中特异性表达的目的,但是部分肝硬化的非肝癌细胞也表达AFP蛋白,故非肝癌细胞也能做为靶细胞被杀伤,因此AFP 作为肝癌特异性转录调控元件的应用也受到限制。 肝癌基因治疗中治疗基因的选择 p53 基因 自杀基因(药物敏感基因) 如导入HSV2TK 细胞因子基因　如：腺病毒载体介导AFP/ IL22 共刺激分子及MHC 分子基 如B7-1 和B7-2，刺激T淋巴细胞的增殖 Caspase 基因治疗存在的问题 没有十分理想的治疗基因。不同个体发生肿瘤免疫逃避的机制可能不同,而目前还没有一个公认的与肝癌的发生、发展密切相关的基因。 体内基因转染效率较低,限制了治疗基因的表达。体外试验效果很好,但体内试验基因转染效率却较差,原因虽然多方面,但目前还没有一个十分理想的治疗载体是其主要原因。 对肝癌发病机制的认识还远远不够。 导入的目的基因难以控制,肝癌细胞的靶向性不强,损害正常肝功能。 肝癌基因治疗的发展方向 多基因联合治疗 降低机体对腺病毒载体的免疫排斥作用和其毒性,使重组腺病毒载体能反复、多次注射,以增强治疗基因的表达水平。 使用增殖腺病毒载体进行肝癌的基因治疗 基因治疗与放疗、化疗、热疗相结合的综合治疗方案 使用细胞毒性较低,且免疫增强作用强的免疫增强因子,如GM2、CSF、IL-12、B7-1 等。 调控目的基因在细胞中的表达,如应用肝癌特异性基因表达载体或使用四环素转录控制开关系统(tetracycline swith on and swithoff system) ,使目的基因有序和可控表达 寻找新的肝癌特异性转录调控元件,或新的肝癌特异性抗原或特异性表达蛋白 寻找新的病毒表达载体 寻找新的肝癌相关基因,尤其是进一步明确肝癌的细胞信号传递机制 小 结 在21世纪，生物学、分子生物学将在肝癌研究和防治方面发挥重要作用。 在诊断方面，分子诊断与分期将成为可能；可根据肝癌侵袭性指标判断肝癌外科治疗的指征和术后预后。 在治疗方面，微创外科的概念将被广泛接受。转移复发研究是进一步延长患者术后生存的重要课题。 肝癌转移是一多基因参与的、多步骤复杂过程，受癌细胞、微环境和宿主遗传学等相互作用的影响。 目前以HBV疫苗预防乙肝、以及HBV和HCV感染的有效治疗等为重点的一级预防，早期诊断和早期治疗为主要内容的二级预防仍将占据重要地位。 Thank you HCC中组蛋白修饰的改变在全基因组和特定基因水平发生。 在核小体组蛋白H2A、H2B、H3、H4和连接组蛋白上已发现至少8种不同类型的翻译后修饰，包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、sumo修饰、腺苷二磷酸核糖基化等。 组蛋白赖氨酸残基的乙酰化和甲基化是目前HCC中研究最为透彻的组蛋白修饰方式。组蛋白乙酰化通常与转录激活有关，而甲基化则因修饰位点的不同可以呈现活化或失活状态。 HCC中多种转录抑制基因与组蛋白H3和H4赖氨酸残基的低乙酰化状态有关。 HC