体积排阻色谱UVDAD工作流程.PDFVIP

体积排阻色谱 UV/DAD 工作流程 AGILENT ADVANCEBIO SEC 色谱柱 安捷伦应用化学家将在本文中为您推荐用于表征生物分子的最佳液相色谱系统及 其配置。他们还将为您提供通用方法的相关指导，帮助您快速着手开展工作，并 介绍如何进一步优化该方法以满足您的特定分离目标。如需了解更多应用信息， 请访问/chem/advancebio Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统 流动相 使用新配制的水相缓冲液或水相 有机相缓冲 / 液进行等度洗脱。使用前确保流动相的所有成 分均已溶解并且用 0.2 µm 滤膜过滤。 指南 • 蛋白质聚集体受多种环境因素影响，包 泵 (G5611A) 内径为 ， 括 、离子强度和温度。因此定量分析 7.8 mm 0.1 - 2.0 mL/min pH 4.6 mm 内径为 。 聚集程度时，研究人员应使用不会影响 0.1 - 0.7 mL/min 样品的流动相。通常首先使用 150 mM 进样器 (G5667A) 磷酸盐缓冲液（pH 7.0 ）进行分析 样品中蛋白质浓度为 1 - 5 mg/mL 时，进样量为 5 - 10 µL。 • 对于常规 SEC 分析，使用 300 mm 色谱柱 柱温箱 (G1316C) • 如需提高样品通量，则使用 150 mm 色 SEC 法分析生物活性蛋白的常规温度为 谱柱并提高流速 20 - 30 °C。 • 如需提高分离度，则串联两根色谱柱 • SEC 属于非相互作用液相色谱技术，因 此需要保证小进样量以实现高效分离。 检测器 (G1315D) 样品量应小于或等于总柱体积的 5% 配备 10 mm 生物惰性标准流通池的 DAD 。 • 建议 SEC/DAD 、SEC/UV 和 SEC/LS 应用 采用 AdvanceBio 2.7 µm SEC 色谱柱。使 用 SEC/MS 分析方法时，安捷伦建议使 描述 130Å 300Å 分析柱 用 Bio SEC-3 色谱柱 4.6 x 300 mm, 2.7 µm PL1580-5350 PL1580-5301 • 为尽可能延长色谱柱寿命，安捷伦建议 4.6 x 150 mm, 2.7 µm PL1580-3350 PL1580-3301 使用保护柱，并且单根色谱柱运行压力 7.8 x 300 mm, 2.7 µm PL1180-5350 PL1180-5301 不超过 200 bar ，两柱串联时运行压力不 7.8 x 150 mm, 2.7 µm PL1180-3350 PL1180-3301 分析型保护柱 超过 400 bar 4.6 x 50 mm, 2.7 µm PL1580-135