第六章胚胎工程2012.ppt

三、胚胎移植技术 所谓胚胎移植（embryo transfer）也称受精卵移植，是指将良种母畜配种后，从其生殖道（输卵管或子宫角）取出受精卵或早期胚胎，移植到同种生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体技术。 （一）胚胎移植的研究历史 1.初级阶段：1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右。 2.发展阶段：1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功。胚胎移植成功率达70-80%。 3.实用化初始阶段： 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英）。 1982- 大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广泛开展。克隆羊诞生。 1．供体、受体的选择 胚胎移植的供体一般是选择需要加速繁殖的有较大生产应用价值的健康的优良畜种，受体则是繁殖能力较强的健康本地品种。 （二）胚胎移植技术 2．超数排卵 3．同步发情 同期发情又称同步发情，就是利用某些激素制剂人为地控制并调整一群母畜发情周期的进程，使之在预定时间内集中发情。 4．人工受精 激素注射结束后，观察到发情后１２小时，开始第一次输精，时隔１２小时进行第二次输精，输精量是常规量的两倍 。 5．胚胎采集 （1）手术法：在配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来。 手术法采胚 （2）非手术法 6．胚胎的检查与鉴定 1）检卵：37度冲卵液静止观察胚胎质量。2）吸卵：注射器或吸卵管。 3）胚胎质量鉴定：卵裂球外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整，无卵裂及异常卵不用于移植。 7．胚胎移植 1）手术移植：非排卵侧子宫角，通过注射器或移卵管刺入子宫角前端，注入胚胎。 2）非手术移植 ：采用空气隔绝的装有胚胎的吸管，装入移植枪，通过子宫颈插入子宫角深部，注入胚胎。 显微镜下的胚胎 所谓胚胎分割（embryo splitting）即是将一枚胚胎用显微手术的方法分割成二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术，来自同一胚胎的后代有相同的遗传物质，因此 胚胎分割可看成动物无性繁殖或克隆的方法之一。 四、 胚胎分割技术 主要仪器设备 显微操作仪 实体显微仪 （一）选择的胚胎: 发育良好的,形态正常的桑椹胚或囊胚. 胚胎分割的理论基础：细胞具有全能性 操作液的培养皿 分割时要注意：要将内细胞团均等分割，若不均等分割会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。 （二）胚胎分割的方法 （1）显微针分割法 在显微操作仪下将胚胎固定--玻璃针切开透明带--移出卵裂球--吹吸卵裂球使之离散--装入预先备好的空透明带。 （2）显微刀分割法 显微刀均分桑堪胚或早期囊胚--分别装入透明带 （3）酶软化透明带后显微分割法 用0.5%链霉蛋白酶软化透明带--玻璃针分割 （4）酶消化去透明带后分割法 链霉蛋白酶去掉透明带--分割裸胚 （5）徒手分割法 分割体积较大胚胎 9.原核变化及融合 精子进入卵内后，精子核膨大，核膜由于泡状化而破裂，并分散在卵细胞质中，其中的染色质也由致密状态开始松散而成为颗粒或细丝状，逐渐形成雄原核。 卵子细胞核在完成两次减数分裂后，染色体首先分散，沿着分散的染色体的边缘汇集了一些小囊，逐渐融合形成一双层包膜，从而形成了一些内含染色体的小囊，即染色体泡。然后，它们相互接近，包膜彼此合并成为一个不规则的雌原核。 雌、雄原核移向卵的中央，相遇，核膜消失，染色体彼此混杂在一起，从而使配子的单倍体恢复成为合子的双倍体。受精完成。 精子进入卵后 变化① 变化② 变化③ 产生卵黄膜封闭作用 形成第二道屏障 尾部脱离核膜破裂 形成雄原核 形成雌原核 激活卵子完成减数第二次分裂，排出第二极体 发育 移动 接触 合并 形成受精卵 受精和胚胎发育全过程 （三）动物胚胎发育及其分子机制 精子和卵子经过受精作用形成受精卵，受精卵经过卵裂、形成囊胚，囊胚进一步发育进入原肠胚阶段，形成不同胚层，再产生器官原基，进一步产生个体。 哺乳动物胚胎发育的基本过程 受精卵 卵裂期 桑椹胚 囊胚（内含囊胚腔） 原肠胚（内含原肠腔） 胚层分化形成胎儿形成 ：在透明带内进行有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎总体积并不增加，或略有减少。 ：由具有全能性细胞构成，细胞数在32个左右，排列紧密，形似桑椹 内细胞团：发育成胎儿各组织 滋养层细胞：发育成胎膜和胎盘 ：最初发育在输卵管进行有丝分裂 滋养层 外胚层 中胚层 内胚层 原肠腔 胚胎发育：指受精卵发育成幼体的过程 胚胎发育 1.卵裂：合子发生分裂形成无数小细胞。卵裂细