组织培养第十章常见植物脱毒与快繁.pptVIP

第一节 农作物的脱毒与快繁 植物组织培养技术已广泛运用于农作物育种和良种繁育，尤其是许多无性繁殖类农作物脱毒及良种快繁，对提高农作物生产的产量和品质发挥了极其重要的作用。 一、马铃薯的脱毒和快繁（一）茎尖培养脱毒1、取材 生产大田顶芽，或块茎，预培养抽生的枝条污染较少。供试材料存在病毒可结合热处理脱毒。2、消毒 自来水冲洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液5～10min，无菌水冲洗2～3次。 3、接种 解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。 4、培养条件 MS、Miller，25±2℃， 1000lx，4周后增至2000～3000 lx，光照16h。5、病毒鉴定 目测法和指示植物鉴定法。 （二）微型薯生产技术 由试管苗生产的重1～30g的微小马铃薯被称为微型薯。不带病毒，增产效果一般在40%以上。 1、试管生产 微型薯一般只有1～5g。用组织培养方法生产微型薯分以下两个步骤：（1）单茎段扩大繁殖（2）微型薯的诱导。 2、温室多层架盘工厂化生产  3、低网畦生产 二、甘薯的脱毒与快繁 （一）茎尖培养 1、茎尖培养脱毒 取高产、优质母株枝条，切成带1芽小段。自来水流水冲洗， 70%酒精10s， 0.1%的升汞10min，无菌水4～5次，或2%次氯酸钠5min，无菌水3～4次。 2、茎尖剥离和培养 解剖镜下剥去芽上较大幼叶，切取0.3～0.5mm含1～2个叶原基的茎尖分生组织，迅速接种到制备好的培养基上。 3、病毒检测 目测法和指示植物鉴定法。 （二）脱毒苗扩繁和种薯的生产 通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。30d左右长成有6～8片展开叶的试管苗。待试管苗繁殖到一定数量后，即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。所结小薯即为原原种薯。以原原种（苗）为种植材料，在防虫条件下的无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯（良种）。 红薯原原种炼苗 第二节 果树脱毒快繁 利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积小，繁殖周期短，全年都能进行繁殖，繁殖系数高等特点。还可以消除果树的某些病毒病，适应果树向品种更新快、矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要。 （二）花药培养脱毒 1、花药培养脱毒技术 春季取单核期花蕾（直径约4mm），4～5℃低温处理24h。浸入70%酒精30s，漂白粉或0.1%氯化汞10～15min。剥取花药放在培养基上。 诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +IBA0.2 mg/L， 继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+ IBA0.05mg/L 2、脱毒苗的检测 指示植物小叶嫁接鉴定法和电子显微镜鉴定法。 二、柑橘 1、茎尖微芽嫁接 砧木种子45℃温水浸泡5min—55～56℃热水处理50min—取出吸干—消毒—剥去种皮—种子接种于MS培养基—27±1℃暗培养—2周后萌发芽苗可作砧木。 接穗材料强健新梢 —热空气处理45min (50℃)—取lcm长芽条—消毒处理—切取0.14～0.18mm微茎尖。 砧木苗切去长根和子叶，上胚轴留1～1.5cm切除顶部，垂直于茎，切开一个倒T字形切口，将微茎尖放置于砧木切口内，茎尖底部和砧木切口形成层紧密贴合。 （二）影响试管育苗的关键技术  芽的反复增殖是香蕉试管育苗的技术关键。芽的增殖效果如何，较重要的衡量指标是增殖率和代期（—次继代培养的时间），均与生长调节剂关系最为密切。细胞分裂素以6-BA 3～4mg／L为宜，增殖率可达到4以上，代期为3～4周，因而增殖效率高。 第三节 蔬菜组织培养一、番茄1、花药培养⑴取花药3～7mm长、单核中期的花蕾。⑵将花蕾用0.1‰吐温40溶液浸泡5min—70％酒精15s—3％的漂白粉10 min—无菌水冲洗—接种⑶从花蕾中取出花药，接种在DBMII＋2.0mg/L NAA＋1.0mg/LKIN的培养基上，27℃、24h光照后黑暗下培养。 2、叶培养⑴取无菌幼嫩叶片，切成5×5mm的小块。⑵MS＋0.2mg/LIAA＋2mg/L BA 27℃、光。⑶25天后，愈伤组织分化芽。一个月后每切块长出2～5个芽。⑷芽转到无激素的MS培养基上，5～10d后形成根。 原球茎再分化 （一）材料和培养基 取l0-l5cm高的芦荟幼苗诱导培养基为MS+(1-6mg/ L)BA+(0.1