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组织学技术 组织学技术 （供动物学、发育生物学硕士研究生用） 参考书目 1．杜卓民 1982 实用组织学技术 人民卫生出版社 2．芮菊生等 1980 组织切片技术 人民教育出版社 3．郑国昌 1979 生物显微技术 人民教育出版社 组织学技术 组织学技术是高等院校生物学、医学、农林院校以及科研单位的一项最基本的实验室技术和工作手段。无论在教学还是在科研工作中，凡是对人体或生物体进行微细结构观察时，大多数需要依靠组织学技术来完成。随着科学技术的不断进步，组织学技术在不断的发展，使得组织学的研究方法很多。目前，组织学的研究方法主要包括一般光镜技术、组织细胞化学技术、免疫细胞化学技术、放射自显影技术、电镜技术和组织培养技术等六大类。本课程计划以同学们的实际操作为主，主要掌握一般光镜技术中的石蜡切片技术。 第一章 一、基本设备 实验室基本设备及常用试剂 组织学实验室的常用设备主要有观察组织标本用的显微镜及制作标本用的必要设备和工具。 （一） 显微镜 种类很多，功能也各不相同。用于组织切片观察的主要是透射光学显微镜。该镜所观察的放大倍数为物镜放大率和目镜放大率之积。为显示观察到的材料的大小，常需要在目镜内安装目镜测微尺。 目镜测微尺为一块圆形玻璃片，普通用测量长度的标尺为直线式，一般长5mm，分成1个大格，每1大格又分成10个小格，共50小格。目镜测微尺安装在目镜的光阑上，有刻度的一面朝下。目镜测微尺每1小格所代表的实际长度（10×或40×）要用镜台测微尺进行标定。参考郑国昌《生物显微技术》P185-189 。 （二） 切片机 切片机一般有三种类型，即旋转式、滑动式、冰冻式。这三种切片机均具有三种主要部件：固定切片刀的刀架。夹持组织片的夹具。推动组织夹具的微动调节器。 滑动切片机多用于火棉胶切片，故又称火棉胶切片机。它常用于制作大块标本、囊状器官和易于塌陷的组织切片。冰冻切片机是将组织切片承托台改换成急速冷冻装置（约-20~-30），这种急速冷冻装置可以是液态二氧化碳，也可以用半导体制冷装置。我院很少使用这两种切片机，而代之以恒冷箱切片机，其实是将切片机安装在低温冰箱 内。 旋转式切片机是许多实验室常用的切片机。该机是依靠一个重轮带动螺纹轴将组织块夹具向前推进并在上下平面摆动。夹具每上下摆动一次，可推动组织块按照需要向前移动一至数个微米。在使用旋转式切片机切片时，一般使用顺序是：将组织块在组织块夹具上夹紧。锁上旋转重轮，使其不能转动。切片刀牢固地安装在刀架之上。将组织块夹具慢慢推向（前、后）刀架上的切片刀刀刃。放开旋转重轮锁卡。将厚度调节器调至较厚的读数（如20微米）。待组织块切至较完整的平面时，再调至所需要的厚度（如7微米）。 （三）恒温箱与干燥箱 恒温箱是实验室的必备设备，主要用于浸蜡、烤片、培养及孵育等之用。实验室常用的是“隔水式电热恒温箱”。其主要优点是保温时间长、温度变化幅度小、比较安全。主要缺点是温度上升下降缓慢。因此，在使用前应提前打开让其升温至60左右。 干燥箱主要用于烘烤洗净后的玻璃器皿和某些需要加热至60以上的操作。此箱特点是升温范围大，可从室温升至200以上，并且具有鼓风装置。主要缺点是安全性能较差，因此，在使用时要随时观察箱内温度。 （四）冰箱 一般家用冰箱即可，主要用于保存染液、试剂（主要是组织化学试剂），并提供切片时的用冰。 （五）磨刀机 实验室目前多用圆盘式磨刀机。切片刀固定在可调的刀架上，刀架能反转切片刀。在切片刀下有一块打毛了的圆盘状厚玻璃，依靠机械运动使圆盘毛玻璃在前后移动的同时缓慢旋转，以达目的。在磨刀时，常需要向毛玻璃上加少量液体石蜡。 （六）天平 应有两种天平，即一般用的药用天平（台秤），容量500克，1/10g感量的即可。再备一台感量为1/1000g的分析或扭力天平供精密称量使用。 （七）一般手术器械及维修工具 解剖刀、手术刀、刀片（单、双面），手术剪、眼科剪等。 （八）染色缸和染色架 染色缸有两种，一种是10片染色缸，又称卧式染色缸；另一种是5片染色缸，又称立式染色缸。 染色架有两种，一种是盖玻片染色架，主要用于制作大量教学制片，另一种是载玻片染色架，由铜、铝或不锈钢制成，不仅可用于染色，还用于烤片。 （九）载玻片与盖玻片 常用载玻片的规格为75（长）×25（宽）×0.8~1.2（厚）mm 常用盖玻片的规格为18~24mm正方形或22×44mm长方形。 新的载、盖玻片必须经清洁液处理后才能使用，方法是先用洗衣粉水冲洗后，再入清洁液浸泡一天以上，取出经清水冲洗，转入95%酒精中浸泡脱脂后，移入干燥箱内烤干备用。 新载、盖玻片也可在2%盐酸酒精（95%酒精100份+盐酸2份）