分子生物学课件chapter5dna的变性与修复.ppt

* chemical reactivity of the bases 3.核苷酸切除修复 UvrABC 核酸切割酶 原核生物 12-13个核苷酸 真核生物 27-29个核苷酸 UvrD (DNA helicase) DNA polΙ Ligase (Nucleotide Excision Repair NER) ★ Rec-A. gene 以某种方式参与DNA损伤修复 ? Rec修复系统比切除修复系统更有效 目前知道 ? Uvr系统负责切除二聚体 ? Rec系统负责消除没有被切除的二聚体 可能造成的后果 4. Recombinative—Repair 复制后修复、E.coli的挽回系统 TT TT AA AA TT TT TT TT AA AA TT TT 变性 E.coli (Rec-A, uvr-a-) D.S. DNA S.S. DNA U.V. 复制 提取 变性 复制过程越过二聚体而在相应新链上留下缺口 ★二聚体后起始 ★ 修复时期的证明 ● 与Rec-A蛋白引起的重组(strand transfer)有关 ● TT dimer未被修复，仅表现在后代群体中TT dimer 浓度的稀释 ● 链的非准确转移，导致突变机率的增加 修复相关机制: 重组修复 (链转移修复) 复制后修复 容易出错 RecA, DNApolymerae ligase 二聚体后起始 RecA 聚合酶、连接酶 重组修复后的损伤位点可 由其它机制进一步修复 RecA蛋白首先与单链DNA结合（需消耗ATP）。于是RecA蛋白即被活化而可将双螺旋解旋和分离，同时企图将它结合的单链与被解旋区域退火，如此继续下去，直到找到互补顺序。只要一旦有一小部份被真正“退火”，ATP供应的能量就会继续驱使配对反应趋于完成。当新的杂交双链形成时，RecA蛋白即从原来的单链掉下来。 Repair double-strand break Nonhomologous end joining : is a backup system in yeast, but in higher cells it is the principle pathway by which breaks are repaired 5. SOS respones (SOS 修复) The SOS response is a global response to DNA damage in which the cell cycle is arrested and DNA repair and mutagenesis are induced. The SOS uses the RecA protein (Rad51 in eukaryotes). The RecA protein, stimulated by single-stranded DNA, is involved in the inactivation of the LexA repressor thereby inducing the response. It is an error-prone repair system. Function of RecA protein a、 DNA 重组活性 b、 与S.S. DNA结合活性 c、 少数蛋白的proteinase活性 mechanism of SOS response SOS 修复－－无模板指导的DNA复制 大剂量的紫外线照射，大量的二聚体产生 SOS系统诱导，错误潜伏的复制超越二聚体而进行 错误碱基 SOS 修复只是SOS反应的一部分 RecA在SOS反应 反应中起核心作用 RecA与LexA组成调控环路 DNA 损伤 SOS RecA受LexA的部分抑制 当DNA复制受阻/ DNA damaged 细胞内原少量表达的RecA-p 与S.S, DNA结合 激活RecA-p的proteinase活性 修复损伤 LexA-p降解 RecA-p高效表达 SOS open 当DNA正常复制时 （无复制受阻，无DNA损伤， 无TT dimer） RecA-p不表现proteinase活性 当DNA复制度过难关后 SOS repair 是一种错误倾向性极强的修复机制 是进化中形成的“ 竭尽全力，治病救人” 的措施 （正