槟榔提取物体外抗柯萨奇病毒B3及单纯疱疹病毒1型和乙型肝炎病毒的研究论文.docVIP

　　槟榔提取物体外抗柯萨奇病毒B3及单纯疱疹病毒1型和乙型肝炎病毒的研究论文 王小燕 张美英 王亚峰 郝静 刘秋英 王一飞 张颖君 杨崇仁 【摘要】 目的从槟榔9种提取物中体外筛选出抗柯萨奇病毒B3，单纯疱疹病毒1型活性成分，从其中3种提取物中体外筛选出抗乙型肝炎病毒的活性成分。方法通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、MTT 法，判断药物毒性及药物抗病毒效应。结果槟榔9种提取物对Hela,Vero细胞具有一定的毒性，而无抗病毒活性，3种提取物不能有效地抑制HepG2.2.15细胞HBeAg的表达。结论槟榔9种提取物体外无抗柯萨奇病毒B3、单纯疱疹病毒1型的作用，3种提取物体外无抗乙型肝炎病毒的作用。 【关键词】 槟榔； 柯萨奇病毒； 单纯疱疹病毒1型； 乙型肝炎病毒 Abstract:ObjectiveTo screen nine extracts of Areca catechu L. for anti-Coxackievirus B3,HSV-1 and three extracts of Areca catechu L. for anti -HBV in vitro.MethodsThe toxic and antiviral effect etric assay for vital cell rate.ResultsNine extracts had certain toxic effects on Hela and Vero cells in vitro, but they had no antiviral activities. Three extracts of Areca catechu L. could not inhibit the expression of HepG2.2.15 cells HBeAg .ConclusionNine extracts of Areca catechu L. have no effect of anti-Coxackievirus B3，HSV-1 and three extracts of Areca catechu L. have no anti-HBV in vitro. Key g/ml，水提物用水溶解高压灭菌1 mg/ml。 1.2 细胞Hela细胞株、Vero细胞株引自美国ATCC。细胞生长液为含10 %新生小牛血清的DMEM ,细胞维持液为含2%新生牛血清的DMEM,常规加入青霉素100 U·ml - 1，链霉素100 U ·ml - 1。2.2.15 细胞HBV DNA 经克隆转染入肝癌细胞(HepG2) 的2.2.15细胞系, 由武汉大学医学院病毒研究所提供。 1.3 病毒柯萨奇B3 病毒(CVB3 )由武汉大学医学院病毒研究所提供。病毒在HepG-2 细胞中活化增殖后, 其滴度为10- 9 TCID50·ml-1,实验用100 TCID50·ml-1。单纯疱疹病毒1型（HSV-1）由武汉大学医学院病毒研究所提供。病毒在Vero细胞中活化增殖后, 其滴度为10-9 TCID50·ml-1,.freell-1。 1.4 试剂及仪器DMEM培养基(Hyclone公司) ;病毒唑(利巴韦林注射液,Ribavirin injection广州市市桥药业有限公司) ; 无环鸟苷(ACV)购于湖北科益药业股份有限公司;CO2 培养箱(日本Sanyo公司) ;超净工作台(苏州净化设备公司) ;相差显微镜(德国Laica公司) ;酶标仪(美国BIO - RAD公司) 。MTT（四甲基偶氮唑蓝）为Sigma 公司产品。 2 方法 2.1 抗CVB3实验 2.1.1 药物毒性实验在96孔培养板上加入2.0 ×105/ml浓度的Hela细胞，100 μl/孔，培养24 h，待其生长为单层细胞，弃去培养液，将槟榔9种不同提取物用维持液配制成不同浓度的药液，加入到细胞中，每个浓度设4个复孔，同时设正常细胞对照组、阳性对照组，置37℃，5％CO2 培养箱里培养48 h，其间置倒置显微镜下观察，观察药物的最大无毒浓度。 2.1.2 药物药效学实验（CPE法）在96孔培养板上加入2.0 ×105 /ml浓度的Hela细胞，100 μl/孔，培养24 h，待其生长为单层细胞，弃去培养液，不同稀释度的药物和病毒各50 μl混合后直接加到单层Hela细胞上，每个浓度设4个复孔，同时设正常细胞对照组、病毒对照组、阳性药物对照组，置37℃，5％CO2 培养箱里培养24～36 h，其间置倒置显微镜下观察CPE。待病毒对照组的细胞病变达到75%及以上时，观察并记录各样品各浓度的细胞病变情况，用MTT法检测细胞的活性。 2.2 抗HSV-1实验 2.2.1 药物毒性实验在